灭活剂和佐剂.pptVIP

3、蜂胶佐剂 是一种优良的天然药物； 具有广泛的生物活性和药理作用（抗菌、抗病毒、抗肿瘤、消炎）； 具有免疫增强作用：能保持抗原特性，增强巨噬细胞的吞噬能力，促进抗体的产生，提高机体的特异性和非特异性免疫力。 （1）蜂胶的处理： 蜂胶（4℃以下贮存） 粉碎过筛 按1：4（W/V）加95％乙醇 室温浸泡24～48h 冷却 过滤或离心取上清 透明栗色纯净蜂胶浸液 4℃以下保存备用 除去干渣计算出浸液中含蜂胶量。 （2）蜂胶佐剂疫苗的制备： 灭活菌液或病毒液，加入蜂胶乙醇浸液，使每毫升菌液中含蜂胶10mg，边加边摇荡，成为乳浊状，即可。 蜂胶佐剂疫苗制备方法： 1、细胞因子类佐剂 细胞因子的概念 是机体的各种细胞在其生命周期中所释放的具有不同生物学效应的物质，是免疫细胞间相互作用的调节信号。该类物质相互诱生，相互影响，构成一个巨大的细胞因子网络（cytokine network）系统，各种细胞借助自己所释放的细胞因子完成各自的功能，在免疫应答中发挥作用。 七、新型佐剂 细胞因子的分类（根据生物活性） 经典的细胞因子： 淋巴毒素（LT）、肿瘤坏死因子（TNF）、干扰素（INF） 2. 对体液免疫和细胞免疫具有调节作用的因子： 白细胞介素（IL）和集落刺激因子（CSF） 1．作为免疫佐剂，提高疫苗的免疫效果 2．作为免疫治疗剂，预防和治疗某些病原感染 3．通过基因重组，构建新型基因工程疫苗 IL-2-AIV-HA重组痘病毒 细胞因子的应用 几种重要的细胞因子 白细胞介素-2（IL-2） 白细胞介素-4（IL-4） 白细胞介素-12（IL-12） γ -干扰素（IFN-γ） 刺激物为抗原或促有丝分裂原（ConA）； T细胞分泌； 无抗原特异性。 糖蛋白，含133aa ，分子量15-35kDa； 70℃ 30 min及pH值2-9范围内稳定。 IL-2 刺激物：抗原或丝裂原；由Th细胞产生 分子量15～20kDa，有2～3个糖基化部位，140个氨基酸 一种强有力的佐剂候选因子 IL-4 是目前发现的唯一主要由B细胞产生的细胞因子，与IL-2有协同作用，所以曾被称为细胞毒淋巴细胞成熟因子（CLMF）和天然杀伤细胞刺激因子（NKSF）。 糖蛋白，分子量75kDa，由40kDa（P40）和35kDa（P35）两个亚单位构成，两个亚单位完全由不同的基因所编码，只有结合为一个完整的分子时才能发挥生物学活性。 IL-12活性高于IL-2和IFN，在极低浓度时就有显著活性，对灭活疫苗、肿瘤和寄生虫抗原具有有效的佐剂活性。 IL-12诱导产生的Th1应答反应尤为引人注目，可望用于主要诱导细胞免疫应答的疫苗佐剂。 IL-12 由致敏T细胞在活的或灭活的病毒等干扰素诱生剂和某些细胞因子作用下所产生； 有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节和免疫佐剂等免疫生物学活性。 主要诱导MHC-II的表达。 目前IFN-γ与抗原杂合的融合分子的研究是个热点，期待其成为一个有效的佐剂。 IFN-γ 2、CpG DNA CpG DNA：指含有非甲基化CpG（胞嘧啶鸟嘌呤二核苷酸）基序的脱氧核糖核酸DNA。 CpG基序（ motif）：指以非甲基化的CpG为基元构成的回文序列，其碱基排列大多为5′-Pur-Pur-CpG-Pyr-Pyr-3′，具有较强免疫活性，称为免疫刺激序列（ISS，immunostimulatory DNA sequences）。 CpG OND：含有非甲基化CpG基序的寡聚脱氧核苷酸 。 细胞因子的分泌和细胞的分化 CpGDNA的免疫刺激效应（作用机制） 温度\能量 酸化内体小泡 DNA-PK TLR-9 胞质内受体蛋白 有丝分裂原蛋白激酶和 转录因子等信号通路 引起B细胞分化，分泌IL-6、IL-10等细胞因子和表达MHCII、B7-1、B7-2等表面分子，并阻止B细胞的凋亡。 直接激活单核细胞、巨噬细胞和树突细胞，分泌IL-12、INF-r等Thl样为主的细胞因子，并刺激MHCII、B7-1、B7-2的表达。 CpG DNA对多种免疫细胞有激活作用 在IL-12协同下激活NK细胞，杀伤活性增强，并分泌IFN-r，IFN-r反过来进一步促进单核细胞、巨噬细胞和树突细胞的激活。 协同刺激抗原特异性B细胞和T细胞分化，在Thl细胞因子的作用下，显著增强获得性细胞免疫优良的T细胞免疫佐剂。 霍乱毒素（CT） 大肠杆菌不耐热毒素（LT） 破伤风类毒素（TT） 3、基因工程减毒素 良好的粘膜免疫佐剂 由A和B两个