间充质干细胞移植治疗糖尿病大鼠早期视网膜病变实验研究-眼科学专业论文.docxVIP

万方数据 万方数据 目 录 英文缩略词表1 中文摘要1 英文摘要3 前 言5 正 文9 第一部分 人脐带和胎儿骨髓间充质干细胞的分离、培养及鉴定 材料与方法9 一、实验材料9 二、实验方法 12 结 果18 讨 论25 结 论28 第二部分 两种间充质干细胞移植于糖尿病大鼠后视网膜内移行及定植观察 材料与方法29 一、实验材料29 二、实验方法31 结 果34 讨 论39 结 论44 第三部分 两种间充质干细胞移植治疗糖尿病大鼠早期视网膜病变疗效观察 材料与方法45 一、实验材料45 二、实验方法47 结 果52 讨 论64 结 论69 全文总结70 参考文献 71 文献综述77 攻读学位期间发表文章情况86 致 谢87 英文缩略词表 缩略词 英文全称 中文全称 DR DM fBM-MSC hUC-MSC STZ PBS ddH2O Tris IgG HRP DMEM FBS SDS PAGE HE GFP GFAP Rho NFL GCL IPL INL OPL Diabetic retinopathy Diabetes mellitus Fetal bone marrow derived mesenchymal stem cells Human umbilical cord mesenchymal stem cells Streptozotocin Phosphase buffered saline Double distilled H2O Tris(hydroxymethy) aminomethane Immunoglobin G Horseradish Peroxidase Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium fetal calf serum Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide gel electrophoresis Hematoxylin eosin Green fluorescent protein Glial fibrillary acidic protein Rhodopsin Nerve fiber layer Ganglion cell layer Inner plexiform layer Inner nuclear layer Outer plexiform layer 糖尿病视网膜病变 糖尿病 胎 儿 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 人脐带间充质干细胞 链脲佐菌素 磷酸盐缓冲液 双蒸水 三羟甲基胺甲基烷 免疫球蛋白 辣根过氧化物酶 达尔伯克（氏）改良伊 格尔（氏）培养基 胎牛血清 十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳 苏木素-伊红 绿色荧光蛋白 胶原纤维酸性蛋白 视紫红质 神经纤维层 神经节细胞层 内丛状层 内核层 外丛状层 ONL PRL FFA F-ERG Outer nuclear layer Photoreceptor layer Fundus fluorescein angiography Flash electroretinogram 外核层 光感受器层 眼底荧光造影 闪光视网膜电图 WB Western-blotting 免疫印迹 解放军医学院博士学位论文 解放军医学院博士学位论文 PAGE 10 PAGE 10 万方数据 作 者：王 欣 学科专业：眼科学 导 师：张卯年 教授 间充质干细胞移植治疗 糖尿病大鼠早期视网膜病变实验研究 中文摘要 目的：本课题首次将 fBM-MSC 用于 DM 动物模型早期视网膜病变的治疗， 通过两种间充质干细胞、两种途径移植治疗 DM 大鼠早期视网膜病变的疗效观 察,旨在探索更为安全有效的供体细胞类型和移植方法，为 MSC 治疗 DR 提供 理论基础和实验依据。 方法：全程无血清间充质培养环境下体外分离、培养及鉴定 hUC-MSC 和 fBM-MSC,利用 HIV 慢病毒表达载体转染 GFP，将表达 GFP 的 P5 代 hUC-MSC 和 fBM-MSC 通过玻璃体腔注射和尾静脉注射两种途径移植到 STZ 诱导 4w 的 糖尿病大鼠体内，检测各组移植前及移植后 1w、4w、8w 大鼠血糖、体重、FFA 等大体情况，石蜡切片 HE 染色测量内层视网膜和外核层厚度变化，冰冻切片 免疫荧光染色观察供体细胞向视网膜的迁移定植及 müller 细胞的增生情况， western-blotting 检测视网膜 GFAP 和 Rhodopsin 的蛋白表达，F-ERG 记录各组 视网膜功能的变化，统计对比后得出结论。 结果：1.从人脐带和胎儿骨髓中均易分离培养出 MSC，细胞纯度高，形态 均一且具有典型 MSC 形态特征，表达 MSC 特异抗原标志，体外扩