尖吻蝮蛇蛇毒对刚地弓形虫侵入宿主细胞的作用研究-病原生物学专业论文.docxVIP

安徽医科大学颈士学位论文尖吻蝮蛇蛇毒对刚地弓形虫侵入宿主细胞的 安徽医科大学颈士学位论文 尖吻蝮蛇蛇毒对刚地弓形虫侵入宿主细胞的 作用研究 硕士研究生：陈兴智 导师：沈继龙教授 孙新教授 安徽医科大学病原生物学教研室 合肥230032 摘要 目的：l观察细胞培养系统中宿主细胞在刁；同剂量源自皖南地区的尖吻蝮蛇 (Agkistrodon acutus)蛇毒的作用下感染刚地弓形虫速殖子的差异： 2观察尖吻蝮蛇蛇毒对徽嚣速殖予侵入宿主细胞时间的影响； 3探讨运用尖吻蝮蛇蛇毒作为佐荆来提高细胞培养用于弓形虫病病原学诊断的 敏感性。 方法：l 以尖吻蝮蛇蛇毒加入分孔培养的IIela细胞中．分别用姬氏染色在普通 光镜下。用IFA染色在荧光显微镜下讣数，观察Hela细胞在该蛇簿作J{j下感染弓 形虫述殖子的百分率： 2 以不同剂量尖吻蝮蛇蛇毒加入分孔培养的TIIP—l细胞中．用流武细胞仪进行荧 光检测。观察TIIP一1细胞在巧i同荆量的尖吻蝮蛇蛇毒的作用下感染弓形虫速殖子 的百分率； 3以分孔培养的Hela纲胞按种微量弓形虫速殖子．在初始时间加入相同剂量的尖 吻蝮蛇蛇毒，观察其对弓形虫速殖子侵入宿主细胞时间的影响。 结果：l姬氏染色榆测结果 安徽医辩犬学颈+学位论文以105个／皿l弓形虫速殖子感染flela细胞，在5．00p 安徽医辩犬学颈+学位论文 以105个／皿l弓形虫速殖子感染flela细胞，在5．00p g／mI和0．25u g／ml 尖吻蝮蛇毒作用下，经相同时间培养，姬氏染色观察结果表明．其宿主细胞感染率 分别比对照组提高了125．5％和81_4％。 2 IF^检测结果 以5．OO g／ml和0．25 g／m1尖吻蝮蛇蛇毒加入Hela细胞一速殖子培养系统。 其细胞感染率均有明显提高。l旷个／ml速殖子纽平均分别比对照组捉商了159．0％ 和49．O％：l∥个／ml组分别比对J姒11i，F均抛商丫127．0％年II 52．0％：t0’个／111组分 别比对照组平均提高了73．o％和20．0％。 3流式细胞仪检测结果 不同剂量的尖吻蝮蛇蛇毒加入HTP—l细胞一速殖子培养系统，用流试细胞仪检 测的结果显示。5．00 g／ml和0．25 g／ml蛇毒作用下细胞感染率明显高于对照 组，二者感染率分别比平均提高了196．5％和38．0％。 4蛇毒对速殖子侵入宿主细胞时间的影响 在尖吻蛇蛇毒的作用下微量接种的速殖子侵入宿主细胞的时问明显缩短，在 含5．00p g／ml尖吻蝮蛇蛇毒作用下。Hela细胞接种102个速殖子／ml组于接种后 45min出现速殖子，对照组Hela细胞中75rain出现速殖子； 10’个速殖子／ml组 Hela细胞中60min出现速殖子，对照组Hela细胞中105min出现速殖子。 5过量蛇毒的影响 实验中发现lO．0 g／ml可导致Hela细胞的中毒，3h后培养细胞出现细胞收 缩、聚集成团、飘浮而死亡，而这一剂量下THP-I系培养细胞却没有出现死亡现 象。 结论：Hela细胞与TflP一1细胞在尖吻蝮蛇蛇镡的作用下在相同时问内感染弓 形虫速殖子数量明显高于对照组．在剂量上，以5．00 g／mt为最适宜剂量；在 5．00 p，g／ml剂量的作用下．可使弓形虫速殖子进入宿主细胞的时闯提前；过量的 蛇毒可致细胞死亡。奉_IiIf究挺示尖吻蝮蛇蛇稚i=i：f以促进弓形虫述嫩予仪入宿土细 胞．在实际应用中，可以作为一种佐剂在检测标奉时提高速殖子检出率，有利于 缩短弓形虫的检出时问。 安徽跃料人学颂十学位论文关键词尖吻峻蛇蛇·球№ja坌lII胞 安徽跃料人学颂十学位论文 关键词尖吻峻蛇蛇·球№ja坌lII胞 ，|III’一I细J世‘j JI；虫 迷m，仪入 Influence ofAgktrodon aculus Snake Venom the Invasion of Toxoplasma gondii Tachyzoites to Host Cells Postgraduate Chen Xing-zh Supervisor Prot’essor Shen Ji—long Sun Xin Department ofMicrobiology and Parasitology，Anhui Medcial University, Heifei． 230032 Abstract Objective：I To observe the Toxoplasma gondff tachyzoites infection ofhost cells in the culture system with the presence ofAgkistrodon_(1cllllIS snake venom ori