间充质细胞特异性ZBTB20基因敲除小鼠模型的建立及表型分析-病理学与病理生理学专业论文.docxVIP

lIlllII lIlllII IIIl llllllIIII I IIIIl lllIllIIII 独创性声明 Y3091 254 本人郑重声明：所呈交的学位论文是本人在指导教师指导下进行的研 究工作及所取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医 科大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同 志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： l础 签字日期：2丛年j二月!L日 万方数据 关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向 关于学位论文使用授权的说明 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大 连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于(请在以下相应方框内打“4”)： 1．保密口，在一年解密后适用本授权书。 2．不保密呼 作者签名： 日期：弘。1年J碉门日 导师签名： 凇％ 日期：阳!萨j月以Et 万方数据 目录一、摘要 目录 一、摘要 1 (一)中文摘要 ．1 (二)英文摘要 3 二、正文 ．．5 (一)略缩词表 5 (二)前言 6 (三)材料和方法 8 1．实验动物 ．．8 2．主要材料、仪器与试剂 ．．8 2．1小鼠基因型鉴定相关耗材及试剂 ．8 2．2免疫组织化学相关仪器和试剂 ．9 2．3 RNA提取及定量PCR相关仪器、耗材及试剂 ．．9 3．常用试剂的配制方法 ．．10 4．主要实验方法 lO 4．1基因敲除小鼠模型建立 10 4．2小鼠基因型鉴定 lO 4．3组织化学染色 10 4．3．1标本制备 1 1 4．3．2 HE染色 ．1 1 4．3．3免疫荧光染色 12 4．3．4 X-GAL染色 12 万方数据 4．4组织中总RNA抽提及实时荧光定量PCR 4．4组织中总RNA抽提及实时荧光定量PCR 一13 4．4．1组织总RNA提取 ．．13 4．4．2逆转录反应 ．．14 5．体重、血糖检测 ．15 6．小鼠的生殖能力、受孕能力检测 ．15 7．小鼠体内脂质代谢指标的检测 ．15 8．统计学分析 ．15 (四)结果 ．．16 1、间充质细胞冯TB20特异性敲除(ZBTB20吖9／Prrxl-cre， MC-ZB20KO)小鼠模型的建立 ．．16 2、间充质细胞ZBTB20特异性敲除小鼠(MC．ZB20KO)的表型分 析 ．．19 (五)讨论 ．．23 (六)结论 25 (七)参考文献 26 三、综述 29 (一)综述 ．．29 (二)参考文献 ．35 四、攻读学位期间发表文章情况 40 五、致谢 ．41 万方数据 大连医科大学硕士学位论文间充质细胞特异性ZBTB20基因敲除小鼠模型的建立及表型分 大连医科大学硕士学位论文 间充质细胞特异性ZBTB20基因敲除小鼠模型的建立及表型分 析 硕士生姓名：高琳 指导教师：邢嵘教授 章卫平教授 专、I匕名称：病理学与病理生理学 摘要 锌指蛋白ZBTB20，又被称为树突状细胞来源的POZ锌指蛋白(Dendritic cell—derived POZ zinc finger，DPZF)，是BTB锌指蛋白家族成员之一，作为一 种转录因子，对于机体生长发育有重要影响。ZBTB20在机体的胰岛、肝脏、海马、 心脏等多种组织器官中均有高表达，它不仅调控胰岛p细胞的功能，指导肝脏中 甲胎蛋白的表达，而且对痛觉感受有重要调节作用。ZBTB20全身性基因敲除 (ZBTB20一)小鼠不仅表现为生长发育迟缓、未成年高发性死亡，而且具有海马发 育障碍、心脏发育障碍、糖脂代谢异常以及造血功能障碍等重要表型。在人群中 ZBTB20基因的突变，会引起Primrose综合症，表现为骨骼发育异常、智力障碍、 特殊面容等多系统的临床症状。然而，有关ZBTB20生理功能的了解仍很初步，各 个组织器官中ZBTB20的作用还没有完全阐明，关于间充质细胞中ZBTB20的功能 还未见报道。间充质干细胞，属于胚胎中胚层的一类多能干细胞，因能分化为间 质组织而得名，在特定的体内外环境下，能够诱导分化成为软骨、骨、脂肪、韧 带、肌肉、肌腱、神经、内皮等多种组织细胞。ZBTB20在间充质中的表达，预示 其强大的调控分化发育的作用。 目的：研究间充质细胞中ZBTB20对机体的调控作用，完善ZBTB20的生理功 能。方法：本课题通过观察章卫平教授实验室建立的ZBTB20全身性基因敲除 (ZBTB20一)小鼠模型，研