甲状腺乳头状癌差异表达microRNAs的筛选及其功能初步研究-外科学(甲状腺外科)专业论文.docxVIP

学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：纭倦需 日期：2011年04月乡飞日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者：职铸言 日期：2011年04月fro Et 摘要甲状腺乳头状癌差异表达microRNAs的筛选及其功能 摘要 甲状腺乳头状癌差异表达microRNAs的筛选及其功能 初步研究 摘要 目 的 MicroRNAs(miRNAs)是一类在植物、动物和病毒中广泛存在的非编码小 分子RNA，长约21．23nt，高度保守，与特定mRNA3’．UTR结合，在转录后水 平调节基因的表达。成熟的miRNAs与其他蛋白质一起组成RISC(RNA Induced Silencing Complex)，通过结合到靶基因mRNA的Y-UTR，从而引起靶mRNA 的降解或者翻译抑制。miRNAs参与调控许多重要的生物学过程，在肿瘤形成过 程中起着重要作用。 甲状腺乳头状癌(Papillary thyroid carcinoma，PTC)是最常见的一种内分泌恶 性肿瘤，约占甲状腺癌的80％，发病率逐年上升，已跃居女性恶性肿瘤第8位， 严重威胁人类的生命健康，是内分泌系统肿瘤领域的研究热点之一。然而，甲 状腺乳头状癌的发病机制至今仍不明确，进一步探索其发病机制对提高诊断和 治疗有着十分重要的意义。 本研究应用microarray芯片技术筛选甲状腺乳头状癌miRNAs的差异性表 达，发现与甲状腺乳头状癌相关的miRNAs，并探讨其与甲状腺乳头状癌发生发 展的关系，为进一步研究甲状腺乳头状癌的分子发病机制提供理论基础和研究 依据。 方法 3例甲状腺乳头状癌标本选自2010年6月郑州大学第一附属医院甲状腺外 科手术治疗的患者，分别提取RNA，应用gParafloTM微流体芯片对其进行分析， 初步建立起甲状腺乳头状癌miRNAs的差异表达谱，对差异表达的miRNAs进 行分析；通过TaqMan MicroRNAAssays进行实时荧光定量PCR验证microarray 芯片结果；运用靶基因预测软件对甲状腺乳头状癌中显著差异的miR-146b．5p 和miR一7进行靶基因预测，同时对所预测的靶基因进行分子生物学功能分析。 摘要结 摘要 结 果 1 相对于癌旁组织，在甲状腺乳头状癌组织中筛选出38个表达上调的 miRNAs，其中显著上调(109211)的为：miR-146b一5p、miR-221、miR-222、 miR．34a、miR．375、miR-31、miR一181a-2掌、miR-21、miR-181e、miR-146b一3p、 “R．181a、miR．1260b、miR-182、miR-1281、miR-22*；而表达下调的miRNAs 有26个，其中显著下调(1092弋-1)的为：miR-7、miR一204、miR一486-5p、miR-335、 miR．7．2堆、miR．3149、miR．374b、miR-126、miR．130a、miR-99a、miR-150、 miR-338—5p、miR·100、miR一3115 tpo．05)。 2 为验证rnicroarray芯片结果，我们挑选显著差异表达的miR-21和 miR．181c进行实时荧光定量PCR，以RNU48作为内参基因，相对于癌旁组织， miR．21的上调倍数为3．81，miR．181c的上调倍数为1．34。 3通过靶基因预测软件，miR．146b．5p筛选出80个靶基因，miR．7筛选出 129个靶基因。 4对靶基因分析后发现，许多靶基因参与了细胞增殖、细胞分化、细胞凋 亡、细胞周期、信号转导通路及血管生成等，其中有些靶基因参与了多个生物 学过程。 结论 l 初步建立起甲状腺乳头状癌的miRNAs表达谱，相对于癌旁组织，15个 miRNAs在甲状腺乳头状癌中表达水平显著上调，14个mi