甲状腺相关眼病患者眼眶脂肪组织及血清中抵抗素表达的研究-眼科学专业论文.docxVIP

刘红霞 刘红霞 博士学位论文 中文摘要 者眶脂肪及血清中的表达水平以及重组的人抵抗素对体外培养的眶前脂肪细胞 增殖、分化的影响。 本课题研究内容包括四个部分 第一部分正常人眼眶组织中抵抗素表达研究 I目的】：了解在正常人眼眶脂肪组织及眼外肌组织中抵抗素基因mRNA及 蛋白的表达情况。 I方法l：眼眶脂肪组织来自眼球摘除患者，跟外肌于斜视患者眼肌缩短术 中获得。通过RT--PCR法检测人眼眶脂肪组织及眼外肌组织中抵抗素基因 mRNA的表达情况；免疫组织化学法检测抵抗素蛋白在人眼眶脂肪组织及眼外 肌组织中的表达。 【结果l：在正常人眼眶脂肪组织及眼外肌组织中均有抵抗素基因mRNA的 表达，PCR产物电泳结果示产物片段约500bp，脂肪组织中抵抗素基因表达相对 灰度值为0．25牡0．025，眼外肌组织中抵抗素基因表达的相对灰度值为 0．178士0．016，脂肪组织中抵抗素基因表达高于眼外肌组织(Po．005)。抵抗素蛋 白表达位于细胞胞浆，免疫组织化学显示正常人眼眶脂肪组织及眼外肌组织中均 有抵抗素蛋白存在。 第二部分TAO患者眼眶前脂肪细胞中抵抗素表达的诱导研究 I目的】：通过检测抵抗素在TAO患者眼眶前脂肪细胞培养分化过程中的表 达，迸一步研究前脂肪细胞的分化过程。 I方法l：选用TAO患者和正常对照眼眶脂肪组织，在体外通过组织块培养 法获取前脂肪细胞，前脂肪细胞在分化液的作用下分化为成熟脂肪细胞。利用 RT-PCR法检测前脂肪细胞及成熟脂肪细胞中抵抗素基因mRNA的表达，对前脂 肪细胞及成熟脂肪细胞进行免疫组化、Western Blot检测抵抗素蛋白的表达，通过 ELISA方法对细胞培养液中抵抗素蛋白水平进行检测。 I结果】：前脂肪细胞中无抵抗素基因mRNA及蛋白的表达。成熟脂肪细胞 刘红霞 刘红霞 博士学位论文 中文摘要 中有抵抗素基因mRNA及蛋白的表达。免疫组化结果显示抵抗素蛋白位于成熟 脂肪细胞胞浆中。Western Blot法检测显示成熟脂肪细胞在分子量约12．5KDa处 见阳性印记条带。ELISA法检测细胞培养液，前脂肪细胞培养液中检测不到抵抗 素蛋白的存在，成熟脂肪细胞培养液中抵抗素蛋白水平在13．35 pg／ml范围。 第三部分TAO患者眶脂肪及血清中抵抗素的测定 I目的】：检测甲状腺相关眼病患者眼眶脂肪组织及血清中抵抗素的表达水 平，为进～步研究抵抗素在TAO发病中的作用打下基础。 【方法l：眼眶脂肪组织TAO患者(16例)来源于严重的TAO行眼眶减压 术时，正常对照(10例)，通过RT-PCR法检测甲状腺相关眼病患者眼眶脂肪组 织中抵抗素基因的表达情况；部分脂肪组织进行组织块培养，孵育48小时后离 心取上清。TAO患者血清样本来自有典型临床症状的TAO患者35例，按CAS 临床活动性评分标准将其分为两大组：非活动期(CAS4)18例和活动期 (cAS4)17例，另外选取正常对照15例。使用ELISA法检测组织块培养液及 血清中抵抗素蛋白的表达情况。 【结果l： 1、TAO患者脂肪组织中抵抗素基因表达的相对灰度值为 0．325士0．019，正常对照眼眶脂肪组织中抵抗素基因表达的相对灰度值为 0．252：i：0．026；TAO患者眼眶脂肪组织中抵抗素基因表达高于正常对照眼眶脂肪 组织，差异有统计学意义(P0．005)。2、TAO患者眼眶脂肪组织块培养液中抵 抗素蛋白浓度为39．390a：4．619 pg／ml，正常对照眼眶脂肪组织块培养液中抵抗素蛋 白浓度为25．557土4．115 pg／ml，两者的差别有统计学意义(P0，005)。3、甲状腺 相关眼病患者血清中抵抗素蛋白水平为12．767士4．450 ng／ml，正常对照组为 21．894：t：10．589 ng／ml，患者明显低于正常对照组，差别有统计学意义(Po．005)。 活动期与非活动期甲状腺相关眼病患者血清中抵抗素蛋白水平的差异无统计学 意义(P0．05)。男女患者血清中抵抗素水平无统计学差异(P0．05)，随年龄增加 血清中抵抗素水平升高，差别有统计学意义(PO．005)。 刘红霞 刘红霞 博士学位论文 中文摘要 第四部分重组人抵抗素对TAO患者眼眶前脂肪细胞 增殖及分化的影响 I目的1：探讨重组人抵抗素对眼眶前脂肪细胞及成纤维细胞增殖的影响，及 对前脂肪细胞分化的作用，阐明抵抗素在TAO发病中可能的作用。 l方法1：培养TAO患者及正常对照眼眶前脂肪细胞，采用MTT比色试验法