甲状旁腺激素对大鼠系膜细胞的影响的实验研究-肾内科专业论文.docxVIP

曼主兰堡垒茎 曼主兰堡垒茎 差墨盥 Abbreviations BSA bovine serum albumin eDNA complementary DNA DEPC diethyl pyrocarbonate dNTP daTP,dCTP,dGTP,dTTP EB ethidium bromide EDTA ethylenediaminetetm-acetate ELISA enzyme-linked immunosorbent assay FBS fetal bovine serum FN 矗bronectin hPTH human parathyroid hormone MCs mesangial cells mRNA messenger ribonucleic acid 0131260 optical dens畸at 260hm OD280 optical density at 280姗 PBS phosphate-buffered saline PTH．R parathyroid hormone receptor PTHrP parathyroid hormone related protein RT．PCR reverse transcription-polymerase chain reaction SDS sodium dodecyl sulfate SSC standard saline citrate TGF-B transforming growth factor beta Tris 2-amino‘2-hydroxymethylpropane一1，3一diol 璺．MG beta microglobin 甲状旁腺激素对大鼠系膜细胞的影响 甲状旁腺激素对大鼠系膜细胞的影响 的实验研究 中文摘要 (在慢性。肾衰早期，当肾小球滤过率下降到50ml／min时，由 于低钙血症、高磷血症、活性维生素D缺乏及钙受体、维生素D 受体下调等因素独立和／或共同的作用，血清甲状旁腺激素(PTH) 水平即已显著增高。过度增高的血清PTH不仅影响骨质代谢，导 致严重的肾性骨病，而且对心血管系统、免疫系统和红细胞生成 等均有负性影响，已经成为一种新型的尿毒症毒素。但是，有关 PTH对肾脏的“毒性”作用，至今鲜有系统的研究。 我们知道，PTH对其“经典”靶组织一一骨和肾小管的作 用，是通过两条信号途径传导的，即受体与配体结合后，激活腺 苷酸环化酶，促进环腺苷酸(cAMP)的生成，进而增加钙内流， 同时激活蛋白激酶A(PKA)；另一方面，受体与配体的结合还激 活磷脂酶C(PLC)，促进三磷酸肌醇(IP3)与二酰甘油(DAG) 的生成，随后，IP3增加胞内钙贮库钙释放，DAG激活PKC，共 同调节细胞的钙磷代谢。此外，除了上述作用机制，研究还发现， PTH能促进成骨细胞、胰岛细胞、心肌细胞、心肌纤维细胞和血 管内皮细胞的增殖；促进骨细胞、软骨细胞上c—fos、c-jun和c．myc 等早期反应基因的表达；显著增加成骨细胞上胰岛素样生长因子 --2-- 硕士学位论文 硕士学位论文 湛冯岚 (IGF．1)和转化生长因子0(TGF．B)的生成；以及诱导心肌细 胞上TGF．B的基因转录，引起心肌肥大，说明PTH可能通过某 种信号传导途径，直接参与调节其靶细胞的增殖分化和一些癌基 因的表达，以及影响靶细胞TGF．D的合成与分泌，产生进一步效 应。此外，有研究表明，与PTH来源于同一祖先基因，与同一受 体结合，产生相似或相同作用的甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)， 能明显促进系膜细胞的增殖和DNA合成，在。肾脏的损伤修复中以 旁分泌或自分泌的方式起到一定的作用。因此，我们有理由相信， PTH也能通过一定的信号转导，作用于系膜细胞，影响其生理或 一／ 病理功能。f 1 为了研究慢性肾衰时PTH这一新型的尿毒症毒素对残余肾 功能的影响，我们以肾小球系膜细胞为研究对象，进行以下研究： ①RT—PCR方法检测大鼠肾小球系膜细胞上PTH受体的表达；② 采用细胞计数、亚甲蓝染色和流式细胞仪等方法，观察hPTHlⅢ 对大鼠系膜细胞增殖动力学的影响；③ELISA和半定量RT．PCR 方法检测hPTHl．34对大鼠系膜细胞合成分泌TGF．B 1及表达TGF． B 1mRNA的影响；④ELISA方法检测hPTHI-34对大鼠系膜细胞合 成纤连蛋白(FN)的影响及其可能的初步机制；⑤大鼠腹腔注 射rPTHl．34，分别于2周和4周后检测血生化和尿酶水平，用免疫 组化方法检测肾脏组织TGF．B 1的表达，以及RT．PCR方法检测 肾脏组织TGF．B mRNA的表达。 --3-- 硕士学位论文 硕士学位论文 湛冯岚 、～ ／ l主要研究结果： I)大鼠系膜细胞