猴N端前脑钠素NT-proBNP酶联免疫分析.DOC

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猴N端前脑钠素NT-proBNP酶联免疫分析

猴N端前脑钠素(NT-proBNP)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围: 96T 150pg/ml - 4000pg/ml 使用目的: 本试剂盒用于测定猴血清、血浆及相关液体样本中 N端前脑钠素(NT-proBNP)含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中猴 N端前脑钠素(NT-proBNP)水平。用纯化的猴 N端前脑钠素(NT-proBNP)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 N端前脑钠素(NT-proBNP),再与 HRP标记的 N端前脑钠素(NT-proBNP)抗体结合,形成抗 体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转 化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 N端前脑钠素 (NT-proBNP)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算 样品中猴 N端前脑钠素(NT-proBNP)浓度。 试剂盒组成 1 2 3 4 5 6 30倍浓缩洗涤液 酶标试剂 20ml×1瓶 6ml×1瓶 12孔×8条 6ml×1瓶 6ml×1瓶 6ml×1/瓶 7 8 终止液 6ml×1瓶 标准品(8000 pg/ml) 0.5ml×1瓶 酶标包被板 样品稀释液 显色剂 A液 显色剂 B液 9 标准品稀释液 说明书 1.5ml×1瓶 1份 10 11 12 封板膜 2张 密封袋 1个 标本要求 1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融 2.不能检测含NaN3的样品,因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 4000 pg/ml 1000 pg/ml 1000 pg/ml 500 pg/ml 250 pg/ml 5号标准品 4号标准品 3号标准品 2号标准品 1号标准品 150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液 150μl的 5号标准品加入 150μl标准品稀释液 150μl的 4号标准品加入 150μl标准品稀释液 150μl的 3号标准品加入 150μl标准品稀释液 150μl的 2号标准品加入 150μl标准品稀释液 1 2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl, 然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽 量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。 3. 4. 5. 温育:用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。 配液:将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用。 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置 30秒后弃去,如此 重复 5次,拍干。 6. 7. 8. 9. 加酶:每孔加入酶标试剂 50μl,空白孔除外。 温育:操作同 3。 洗涤:操作同 5。 显色:每孔先加入显色剂 A50μl,再加入显色剂 B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色 15分钟。 10.终止:每孔加终止液 50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。 11.测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD 值)。测定应在加终止 液后 15分钟以内进行。 操作程序总结: 计算 2 以标准物的浓度为横坐标, OD值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。 注意事项 1.试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30分钟后方可使用,酶标包被板开封后如未 用完,板条应装入密封袋中保存。 2.浓洗涤液可能会有结晶析出,稀释时可在水浴中加温助溶,洗涤时不影响结果。 3.各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。 4.请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD值 大于标准品孔第一孔的 OD值),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n倍)后再测定,计 算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)。 5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物请避光保存。 7.严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准. 8.所有样品,洗涤液和各种废弃物

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