间充质干细胞诱导免疫抑制性中性粒细胞促肿瘤发展-呼吸病学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 目的： 研究小鼠骨髓间充质干细胞与中性粒细胞共培养后，中性粒细胞对 T 细胞 免疫的影响，并探索其分子机制，以及共培养诱导后的中性粒细胞对小鼠 4T1 肿瘤进展的影响。 方法： (1) 通过体外分离培养与提纯小鼠骨髓间充质干细胞，骨髓中性粒细胞。 (2) 通过体外共培养体系，Annexin-V-PI 标记，流式细胞仪检测中性粒细胞凋亡 情况。 (3) 体外共培养后中性粒细胞影响 T 细胞增殖实验：通过 Anti-CD3 抗体刺激 T 淋巴细胞增殖，并用 CFSE 检测其增殖率，同时检测部分 T 细胞激活 Marker （CD25、CD69、CD62L、CD44）。 (4) 采用基因芯片和 RT-PCR 研究处理组和未处理组转录水平情况。检测各组中 性粒细胞精氨酸酶 1 活性水平。 (5) 小鼠体内注射共培养的中性粒细胞与 4T1 小鼠肿瘤细胞建造肿瘤模型，记录 肿瘤体积生长趋势。 结果： (1) 通过 CD45 、CD11b 双阴选，CD11b、 Ly-6G 双阳选分别能够得到所需间 充质干细胞、中性粒细胞。 (2) 共培养后中性粒细胞的生存时间更长，凋亡率减少。 (3) 在体外经过 MSC 处理的 PMN 能够抑制 T 淋巴细胞的增殖和激活。 (4) 共培养组精氨酸活性上调，转录水平上 iNOS、 saa3 、IL-10 、IL-10R 等免 疫抑制基因上调。 (5) 肿瘤模型示实验组 4T1 肿瘤体积增长比对照组迅速。 结论： (1) 在体外小鼠骨髓间充质干细胞能促进中性粒细胞的存活，减少凋亡。 (2) 在体外经过共培养后的中性粒细胞，可能经Arginase 1、iNOS介导抑制T淋巴 III 细胞的分裂增殖反应。 (3) 在转录水平上，共培养后的中性粒细胞与未处理组呈现较多差异, iNOS、 saa3 、IL-10 、IL-10R 等上调。 (4) 小鼠 4T1 肿瘤模型示共培养后的中性粒细胞促进肿瘤进展。 关键词：间充质干细胞，中性粒细胞，免疫抑制，4T1 肿瘤 ，T 细胞增殖 IV Ab Abstract ABSTRACT Introduction: Accumulating evidences indicates a critical role of neutrophils in the pathophysiology of different types of cancer. Increased numbers of neutrophils obtain suppressive function during tumor development, yet the mechanisms are poorly understood. Therefore ,it is necessary to study the mechanisms modulating the function of neutrophils in the context of mesenchymal stem cells (MSCs), the key components of tumor microenvironment. Methods: Bone marrow-derived MSCs were isolated from Balb/c mice,and characterized by surface markers. Suppressive Function of neutrophils was evaluated by anti-CD3 stimulated T cell proliferation assay and 4T1 breast tumor model, The molecular mechanisms were explored by transcriptional profiling, real time RT-PCR, and arginase activity measurement. Results: Co-cultured with MSCs significantly inhibited apoptosis of resting bone marrow neutrophils and zymosan A induced neutrophils. After coculture bone marrow neutrophils could inhibit anti-CD3 stimulated T cells proliferation in vitro. In vivo experiments showed that MSCs-treated neutrophi