间接夹心ELISA检测鸭肿头败血症病毒的研究-预防兽医学专业论文.docxVIP

论文独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得 论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得 的成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，学位论文中1i包含 其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得四川农业大学或 其它教育机构的学位或证书所使爿过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做 的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名 铷赫差 加哼年《n；、日 关于论文使用授权的声明 本人完全了解四川农业人学有关保留、使州学何论文的规定，即：一、≯校确权保留并向田家有 关部f J或机构送交论文的复印ll：$ll电r版，允|午论文被商阅和借阅，可以采刖影印、缩印或¨描 筲复ff)-T-段保仔、汇编学何论文。同意四川农qk人学可以HJ不同方式往不同媒体}：发农、传播学 何论文的全部或部分内容。 瞅生签名：知q鹕q-、畎p¨。、 萄年6-x}。日 卿签名：讶女业岛 。脚7 T-7_}j j 7口 2 中文摘要近年柬，四川等地出现了一种具有发病急、传播快、死亡率高等特点的一种新型 中文摘要 近年柬，四川等地出现了一种具有发病急、传播快、死亡率高等特点的一种新型 鸭病毒性烈性传染病，各种年龄，各种品种鸭均易感，发病率和死亡率均可达80％ 上，给当地养鸭业带来极大的损失。出于“鸭肿头败血症”与鸭瘟等疫病在l临床症状、 病理变化等方面有许多相似之处，给临床诊断带柬困难。为了更好的防制“鸭肿头败 血症”，减少其带来的巨大损失，本试验建立了一种快速诊断和检测“鸭肿头败血症” 的间接央心LISA方法。 以本实验室分离并鉴定的鸭肿头败血症病毒株xD株为抗原，提纯后免疫鸭、兔， 制备的高免血清用“于辛酸一硫酸铵提纯法(CA—AS)”，获得纯化的鸭抗xD病毒IgG 和兔抗xD病毒IgG，建立了检测鸭肿头败血症病毒抗原的间接央心ELISA法。经反 复筛选，确定其最佳工作条件为：包被用鸭抗XD病毒IgG浓度为8ug／ml，包被温度 和时间分别为37。C1．5h，封闭液为0．5％明胶，封闭条件为37。C1．5h，抗原孵育条件 为37。C 1．5h，兔抗xD病毒IgO浓度为5ug／ml，孵育条件为37。C2h，酶标羊抗兔抗 体浓度为l：2000，孵育条件为37。C2h，底物作用时间为30m J n，洗涤液(保温液) 为0．02mol儿PH7．2 PBS(含0．15t001／L NaCl，0．05％上温20)，保温液为沈液加 5％牛血清。阴阳性结果判定的临界oD值为0．412。重复性试验结果：3份阳性样品变 异系数为2．O～3．5％，3份阴性样品变异系数为4．6～9．O％，小于规定的板内变异系 数lO％的范围。 建立的间接央心ELISA法具有高度特异性，不与鸭肿头败血疵阴性抗原、鸭大肠 杆菌抗原、鸭瘟、鸭肝炎病毒抗原呈现交叉反应。 建立的间接央心ELTSA法，具有高度敏感性，其敏感性比琼脂扩散实验高1280 倍，包被后的酶标板洗涤后在4。C保存，至少可以保存3周。 用间接央心ELISA法检测实验病死鸭各组织器官中鸭肿头败血症病毒，以心、肝、 肺、肾检出率最高，达100％：脑、脾和胰次之，分别为90％、80％、40％。 关键词：鸭肿头败血症病毒；呼肠孤病毒，间接央心El ISA：检测 Detection Detection of Duck Swol len Head Septicemia Virus with Indirect Sandwich ELISA Zheng Lin—ying(preventive veterinary medfcine) Di rected by Jiang Wen—can Abstract：A new type Vi rosi s in ducks with the characteri stics of befng acute，transmit rapidlY and high mortal ity rate，has been observed in sichuan and other provinces since 1998．The disease could infect al l days ducks and all kinds of breeds．Moreover its’morbidi ty and mortality reach over 80％． which aroused disastrous loss to local duckeries．The disease 100ked like Duck Plague in c1 inical symptoms and patho]og