间充质干细胞对脓毒症大鼠心肌保护作用初步研究-急诊医学专业论文.docxVIP

中文摘要 中文摘要 第一章骨髓间充质干细胞培养及鉴定 目的：通过全骨髓贴壁培养法分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞，培养出足量 的P3代骨髓问充质干细胞及其培养一tz清液来满足实验需要。初步了解在3种储存温度 下间充质干细胞的细胞数变化。 方法：脱颈处死60．809清洁级SD大鼠，分离其双侧股骨、胫骨。超净台中冲洗骨髓 腔。骨髓冲洗液离心弃上清后，使用大鼠骨髓问充质二{二细胞完全培养基在二氧化碳培养 箱中培养。倒置显微镜观察其生长情况，传代至P3代时用流式细胞仪鉴定。使用 Countstar细胞计数仪观察间充质干细胞在37。C、25。C、4。C储存情况下细胞数变化。 结果：流式细胞仪证实为骨髓间充质干细胞，镜下其生长状况良好。间充质干细胞在 37。C、25℃、4 6C储存情况下短时间内细胞数未见明显下降。 结论：全骨髓贴壁法可分离出骨髓问充质干细胞，其纯度可满足实验要求。 第二章间充质干细胞对脓毒症大鼠心肌保护作用 目的：研究间充质干细胞及其培养上清液对脓毒症大鼠心肌的保护作用机制。 方法：55只清洁级雄性SD大鼠，按随机数字表法分为假手术组、脓毒症组、问充质 干细胞组和间充质干细胞培养上清液组。除假手术组外各组均采用盲肠结扎穿孔术 (CLP)脓毒症模型。术后假手术组和脓毒症组尾静脉注射O．5m10．9％生理盐水，问充 质干细胞培养上清液组尾静脉注射收集的P3代大鼠骨髓间充质干细胞培养上清液 0．5ml，间充质干细胞组尾静脉注射重悬于O．5m10．9％生理盐水的2×106个P3代骨髓问 充质干细胞。各组均在手术24h后心脏采血，双抗体夹心ELISA法检测TNF．Ⅱ，IL．10， Tn．T。心脏置于4％多聚甲醛液体中48．72h，常规石蜡包埋，HE染色。 结果：TNF．CL值：问充质干细胞组、上清液组TNF．c【水平较脓毒症组明显降低，差异 有统计学意义(氏0．01)。IL—10值：间充质干细胞组IL．10水平较脓毒症组升高，差异 有统计学意义(户0．05)；脓毒症组与上清液组及假手术组差异无统计学意义(JP0．05)。 Tn—T值：问充质干细胞组、．卜清液组Tn．T水平较脓毒症组明显降低，差异有统计学意 义(P0．叭)；间充质干细胞组与上清液组及假手术组差异无统计学意义(P0．05)。 结论：间充质干细胞及其培养上清液对脓毒症大鼠心肌损伤具有保护作用，其机制可 万方数据 能通过调节炎症反应实现。关键词：间充质干细胞，间充质干细胞培养上清液，脓毒症，心，炎症 能通过调节炎症反应实现。 关键词：间充质干细胞，间充质干细胞培养上清液，脓毒症，心，炎症 介质 万方数据 AbstractChapter Abstract Chapter I Culture and identification of bone marrow mesenchymal stem cells objective：To separate．culture and purify rat bone marrow mesenchymal stem cells by whole bone marrow adherent culture method in order to develop sufficient amount of P3 MSCs and its supernatant to meet the needs of the experiment．The changes of the number of mesenchymal stem cells in 3 storage temperatures were detected Methods：The 60-809 SPF level of SD rats were put to death by cervical dislocation and their bilateral femorals and tibias were separated．Their cavitas meduUaris were douched in the super-clean bench．After bone marrow fluid was centrifuged and discarded its thesupematant， it was cultured with the completed medium of rat bone marrow mesenchymal stem cells in C02 gas incubator．The growth was observed by inverted microscope，the P3 generation of bone marrow mesenchymal stem ce