间充质干细胞对人结肠癌细胞SW4810上皮间质转化的影响及可能机制的体外研究-肿瘤学专业论文.docxVIP

㈨II ㈨II I I I[I I[II III 111 III f Y1 900423 目 录 中文摘要 ．．． 1 英文摘要 4 研究论文间充质干细胞对人结肠癌细胞SW480上皮．间质转化 的影响及可能机制的体外研究 前言月IJ吾 ．．’7．．7 材料与方法 ．．8 结果 15 附图 19 附表 26 讨论 28 结论 33 参考文献 34 综述EMT与肿瘤的关系及其相关机制 38 致谢 44 个人简历 45 中文摘要间充质千细胞对人结肠癌细胞SW480上皮间质转化的影响 中文摘要 间充质千细胞对人结肠癌细胞SW480上皮间质转化的影响 及可能机制的体外研究 摘 要 目的：本实验通过间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)体外作 用于人结肠癌SW480细胞，观察其上皮一问质转化(epithelial mesenchymal transition，EMT)的相关蛋白表达改变情况，研究MSC对SW480细胞内信号 蛋白／13一连环素(Wnt／13一catentin)信号通路的调控作用和对此通路相关靶基 因基质金属蛋白酶．7(MMP．7)，环氧化酶一2(cox．2)，13-catentin的影响， 探讨间充质干细胞对人结肠癌侵袭转移的影响及可能机制，为临床应用间 充质干细胞治疗结肠癌提供理论依据。 方法：选取脐带血来源间充质干细胞，人结肠癌SW480细胞进行体 外培养，收集3．8代间充质干细胞的培养上清液。将SW480细胞设立对 照组与实验组，对照组细胞用DMEM培养液培养，实验组细胞分别用含 20％、40％、80％浓度间充质干细胞培养上清液的DMEM培养液培养。1、 采用MTT方法检测各实验组SW480细胞的抑制率，筛选受影响最明显 时间；2、采用划痕实验法观察48小时内各组划痕愈合程度；3、流式细 胞术(flowcytometry，FCM)分别定量测定48小时后对照组及各实验组人 SW480细胞上皮．间质转化的标志蛋白E。钙黏着蛋白(E．cad)、N．钙黏着蛋 白(N．cad)表达的变化。结合划痕实验及FCM结果筛选作用最明显浓度组； 4、应用FCM检测40％浓度MSC上清液培养人SW480细胞48小时后 Wnt／[3．catentin信号通路下游靶基因MMP．7，COX．2表达情况。5、采用 逆转录．聚合酶链反应(revers transcription PCR，RT-PCR)法验证40％实 验组SW480细胞48小时后MMP．7，COX．2的表达改变，并检测上游基 因13-catentin表达情况。 结果： 1 MTT结果显示：与对照组相比，各实验组培养24h后测得的抑制率分 别为(47．0+8．3)％、(72．4+4．8)％、(78．3+4．7)％，与对照组相比均 具有统计学意义(PO．01)，且各实验组之间两两相比也具有统计学意 义(PO．01)。于24h、48h、72h检测实验组抑制率，20％实验组抑制 率由(47．0+8．3)％升至(56．04-3．8)％，40％实验组由(72．4+4．8)％ 中文摘要升至(91．0+5．1)％，80％实验组由(78．3士4．7)％升至(93．3士4．9)％，均逐 中文摘要 升至(91．0+5．1)％，80％实验组由(78．3士4．7)％升至(93．3士4．9)％，均逐 渐增高。各实验组组间相比48h与24h具有极显著性差异(Po．01)， 而各实验组在诱导72h后与48h相比抑制率无明显统计学意义 (PO．05)。MTT实验结果：各实验组在作用48h时抑制效果最为显 著。 2划痕实验结果显示：光镜下显示，MSC作用48h后，与对照组相比， 不同浓度实验组SW480细胞迁移均减缓，对照组划痕较各实验组划痕 明显变细。划痕宽度：对照组20％组40％组=80％组。说明MSC对 SW480细胞迁移有一定抑制作用，且40％，80％实验组划痕在各时间 点划痕宽度无明显改变。 3 FCM测定E．cad、N．cad表达结果显示：不同浓度MSC上清液与SW480 细胞培养48h可使SW480细胞E．cad表达呈上升趋势、N—cad表达呈 下降趋势，符合肿瘤细胞上皮．间质转化过程受到抑制时的分子表现。 E．cad表达由1升至1．148，N．cad表达由1降至0．977，均具有统计学 意义(P0．05)。20％实验组与其它实验组组间具有统计学差异 (P0．05)，但40％浓度组与80％浓度组之间无明显统计学意义 (PO．05)。提示40％浓度组对SW480细胞影响最为显著。 4 FCM法检测加入40％MSC上清液实验组与对照组相比，48小时后 SW480细胞中MMP．7蛋白表达由1降至0．965士0．007，COX．2蛋白表 达由1降至O．89士0．0035，二