基于活性的化学小分子探针的设计与合成及其抗肿瘤活性研究-药物化学专业论文.docxVIP

lIIII[11111IIII![1111111111111111111IIIlllUlIlllY1 lIIII[11111IIII![1111111111111111111IIIlllUlIlll Y1 928327 基于活性的化学小分子探针的设计与合成 及其抗肿瘤活性研究 学位论文完成日期： 7“,t／．6、| 指导教师签字： 答辩委员会成员签字： 悯¨、P ≯h嵌． 卅芝 2匆 弓客孤入、 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其 他人已经发表或撰写过的研究成果， 也不包含未获得 (注：如没有其他需要特别声明的，本栏可空)或其他教育机构的学位或证书使 用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示谢意。 学位论文作者签名： 签字日期：2．,0t1年占月7 Et 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，有权保留并 向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学技术信息 研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公 众提供信息服务。(保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 导师签字： 签字日期：劢『『年6月 f El 签字日期：砂，『年多月／ El 摘 摘 要 新药研发是一个漫长而又耗时的过程，通常包括如下几个阶段：靶点的鉴别、 先导化合物的发现、小分子化合物的结构优化、临床前药效学和毒性评价及临床 试验等。其中靶点鉴别是药物发现过程的开始，也是最为关键的阶段之一。利用 化学小分子的多样性，选择适当的活性小分子，设计合成能够高选择性地作用于 靶点蛋白，同时探测蛋白质的功能、结构以及与活性小分子作用模式的探针—— 化学小分子探针，可以为重大疾病的诊断和防治提供新的标记物、新的药物作用 靶点和新的先导结构，从而为创新药物的发现奠定基础。 近年发展起来的基于活性的蛋白质组学研究，结合点击化学技术，是运用设 计合成末端带有炔基或叠氮基且同时还具有活性的小分子探针共价标记靶蛋白 后，将改造后末端带有炔基或叠氮基报告基团(Reporter 01Ta曲，如荧光素或生物 素，通过点击化学连接到探针分子上，这样就可以成功标记、检测或用来纯化其 作用的靶点蛋白。 格尔德霉素是目前开发较为成功的HSP90抑制剂，具有很强的抗原虫和抗肿 瘤活性。格尔德霉素通过竞争性结合HSP90的N．末端ATP／ADP结构域，特异性地 抑制HSP90所必需的ATP酶活性，从而抑制了的分子伴侣功能，对肿瘤细胞的生 长、生存、凋亡产生重要影响。 本课题在已知的格尔德霉素抗肿瘤作用构效关系基础上，在其分子结构的17 位引入末端炔基或叠氮基团，设计合成源自格尔德霉素，具有活性的探针(如可 以选择性、特异性与HSP90相结合)。与经修饰、改造后带末端炔基的报告基团 罗丹明B在点击化学条件下，与已经和靶点蛋白共价结合的探针分子相链接，以 标记肿瘤细胞内的靶点蛋白。 本论文的具体内容包括： 本论文的具体内容包括： 1、格尔德霉素的发酵制备与分析鉴定 在格尔德霉素的发酵过程中发现了6种形态菌落(GFl，GF2，GF3，MFl， MF2，MF3)，分别对其做了发酵条件摸索。发现使用固体平板培养基培 养时，用燕麦琼脂比较适合菌株缓慢生长，有利于后来的液体发酵培养。 防止初级代谢过于旺盛，次级代谢反而受到了抑制，菌体容易老化失去 活性。液体发酵培养超过6天，培养物变得十分粘稠，使得提取分离变得 困难。因此用GFl作为种子接种在液体培养基，培养6天后，立刻进行提 取分离为最佳发酵选择。后经提取纯化，最终得到产率较高，纯度大于 95％的格尔德霉素。 2、格尔德霉素化学小分子探针及报告基团RBl的设计与合成 共设计合成了格尔德霉素化学小分子探针3个，通过与GA．FITC竞争结合 HSP90a实验，发现G2与HSP90a具有较强的亲和作用(ECso=13nM)。设计 合成了报告基团RBl。靶点蛋白标记实验表明，其非常适合用点击化学。 3、G2．RB 1．HSP90a用作高通量筛选(HTS)模型的建立 利用G2．RBl．HSP90a建立了适合用作高通量筛选的模型：从结果可知， DMSO(v／v)含量不超过4％为佳。最后优化的条件为G2(2nM)与Hsp90a (30nM)亲和反应3小时，加入RBI(5nM)和CuI(1 nM)，DMSO(v～)含量不 超过4％为佳。通过该条件对已知的Hsp90抑制