健康人群流脑抗体水平调查.doc

健康人群流脑抗体水平调查 了解汶川地震灾区健康人群流行性脑膜炎（流脑）A群、C群抗体水平，为制定预防控制措施提供依据。 方法 采集灾区灾民安置点中5~年龄组、10~年龄组、15~年龄组及25~年龄组健康人群血液标本293份，应用ELISA试剂盒检测A、C群流脑抗体水平。 结果 汶川地震灾区健康人群A群流脑抗体总阳性率为82.3%（241/293），抗体含量中位数为4.86μg/ ml；C群流脑抗体总阳性率为71.3%（209/293），抗体含量中位数为4.39μg/ ml。 结论 汶川地震灾区健康人群A群、C群流脑抗体水平均处于较高水平。灾区流脑A+C群疫苗加强接种为预防流脑流行发挥了重要作用。 ‘5.12’汶川地震发生后，灾民居住环境改变，卫生条件特殊，灾民安置点人口密度大为确保地震灾后无大的疫情发生，6月1日起卫生部对全体灾区中小学校学生加强接种流脑A+C疫苗。本次调查监测灾区健康人群流脑抗体水平，评价加强接种的效果及必要性，为流脑的预防和控制提供参考数据。 1 材料与方法 1.1试剂 A、C群脑膜炎奈瑟菌多糖抗体ELISA试剂盒（北京绿竹生物制品有限公司）,批 1.2 血清 2008-06/2009-05，单纯随机抽样采集灾区灾民安置点中健康人群血液标本293份，采样地点主要包括绵竹和安县两个地区：绵竹市区灾民安置点、绵竹三星社区灾民安置点，居住人群分别来自剑南镇、玉泉镇、金花镇、土门镇、汉旺镇、遵道镇、九龙镇、清平乡、天池乡等乡镇；安县安昌镇（现已划归北川县）、安县黄土镇，居住人群分别来自安昌镇、花荄镇、黄土镇、塔水镇、秀水镇、河清镇、界牌镇、永河镇、雎水镇、茶坪乡等乡镇，遍布整个安县。 样品按年龄分组，5岁年龄组51份，10岁年龄组72份，15岁年龄组94份，25岁年龄组76份，男164份，女129份。所有10岁年龄组样品，绝大多数5岁年龄组和15岁年龄组的样品均采自上述灾民安置点板房学校，其余样品采自上述灾民安置点板房社区。受试者均在灾民安置点居住15天以上，未发现有呼吸道及相关感染症状。血液样品采用无菌真空管采集，分离血清，-20℃保存备用。 1.3方法 严格按照试剂盒说明书操作。测定时每个试剂盒均绘制单独的标准曲线，根据所得标准曲线计算血清样本中A群和C群脑膜炎奈瑟菌抗体含量。 1.3.1参比品稀释 从冰箱取出参比品，室温放置20min使其温度恢复到常温。 A群试剂盒抗体参比品加入0.5ml稀释液，浓度即为1.0μg/ml；C群试剂盒抗体参比品加入2.5ml稀释液，浓度为1.0μg/ml。按表1所示浓度稀释参比品。 1.3.2 样品稀释 吸取10μl血清样品加入990μl稀释液中混匀备用，即为1:100稀释，再进行1:400稀释。检测1:100和1:400两个稀释度。 1.3.3 标准曲线绘制和样品检测 ① 每个酶标板设2个空白对照，2个阴性对照，2个阳性对照，空白孔不加样品。每个孔内加入100μl样品、阴阳性对照或参比品。②孵育：封酶标板，37℃孵育60min。 ③洗涤：甩干孔内液体，洗涤液充分洗涤5遍，甩干。④加酶标结合物：每支冻干抗人IgG酶结合物加入0.2ml洗涤液，使其完全溶解。用洗涤液作1:120倍稀释。每孔加入稀释的酶标结合物100μl，封板，37℃孵育30min。⑤洗涤：同③。⑥显色：显色剂A液和B液等体积混合后，每孔加入100μl，37℃避光显色10min后，每孔加入终止液50μl。 1.3.4 吸光值测定 设定酶标仪波长为450nm，空白孔调零后，测定吸光值。 1.4 结果判定标准 结果判断标准：阳性对照OD值＞0.50，阴性对照OD值＜0.20试验成立；根据WHO标准，抗体浓度≥2μg/ml时，表明对机体具有保护作用，判断为阳性。 1.5 抗体含量计算 根据参比品的试验结果绘制标准曲线，以参比品浓度为X轴，以吸光度值为Y轴做直线回归方程，方程式为y=a+bx，将待检样品的吸光度值（y）代入方程式中，计算不同稀释度时血清样品抗体含量（x，μg/ml）。计算样品抗体含量时，选择样品吸光值在0.3～1.0之间的数值代入方程式。再乘以样品稀释度，即为血清抗体的含量。 1.6 统计分析 用中位数描述各群流脑抗体水平的集中趋势。比较不同性别，不同年龄组之间的抗体阳性率用 检验。所有资料均用EXCEL和SPSS12.0分析。 2 结果 2.1 标准曲线的绘制 每次测定同时作工作曲线，每个试剂盒的工作曲线只用于本试剂盒酶标板测定的样品。图1是测定A群流脑抗体含量的标准曲线之一。 3 讨论 本次调查结果显示，灾区健康人群A群、C群流脑抗体含量均较高，与我国A群和C群流脑疫苗计划接种率较高及灾后加强接种流脑A+C疫苗