草鱼碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质研究-Core.PDF

第 44 卷 　第 5 期 ( ) Vol . 44 　No . 5 厦门大学学报 自然科学版 　2005 年 9 月 J our nal of Xiamen U niver sit y (N at ural Science) Sep . 2005 　 草鱼碱性磷酸酶的分离纯化与部分性质研究 张继平 ,林建成 ,谢进金 ,陈清西 (厦门大学生命科学学院 ,细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室 ,福建 厦门 36 1005) 摘要 : 用 Tri sHCl 缓冲液抽提 ,硫酸铵分级沉淀 ,D EA E纤维素和葡聚糖凝胶层析 , 从草鱼肠中提取出碱性磷酸酶 ( ) ( ) AL P . 提取倍数为 6 . 74 , 比活为 684 U/ mg 蛋白. 酶液经 PA GE 呈现单一带 ,该酶催化对硝基苯磷酸二钠 p N P P 水解反 应的最适 p H 值为 10 . 4 1 ,最适温度为 27 ℃, Km 值为 1. 0 1 mmol/ L ,酶的热稳定性与 p H 稳定性研究表明:该酶在 p H 6 . 6 ～11. 5 区间和在温度低于 45 ℃下稳定. 研究金属离子对酶活力影响的结果表明:一价金属离子 Li + 、Na + 和 K+ 对酶活力 没有影响 ;二价金属离子 Mg2 + 、Mn2 + 和 Co2 + 对酶有不同程度的激活作用 ;Zn2 + 对酶有抑制作用. 关键词 : 草鱼 ;碱性磷酸酶 ;分离纯化 ;温度 ;p H ;金属离子 中图分类号 : Q 356 . 1 　　　　　文献标识码 :A 　　　　　文章编号 (2005) ( 　　碱性磷酸酶 Alkaline p ho sp hat a se , EC 3 . 1. 3 . 1 , 1 . 2 　试验方法 简称 AL P) 广泛存在于动物 、植物及微生物体内,是一 1. 2 . 1 酶的分离纯化 种膜结合蛋白,在生物体内直接参与磷酸基团的转移 参照文献[ 1] 的方法 ,适当修改. 用草鱼肠为提取 和代谢等生理过程 ,对体内钙磷的吸收与代谢 、维持体 酶的材料 ,用冷蒸馏水漂洗后 ,按 1 1 加入 0 . 0 1 mol/ 内适宜的钙磷比例起重要作用[ 1 ] . 目前国内外学者已 ( ) L Tri sH Cl 缓冲液 p H 7 . 5 ,含 0 . 2 mol/ L N aCl 4 ℃ 对多种贝类及几种鱼类的 AL P 进行了研究[2～4 ] ,但对 ( ) ( 抽提 4 h 、离心 15 000 g ,4 ℃,30 min 后取上清液 粗 无胃鱼类草鱼的研究未见报道. 草鱼是我国的淡水养 ) 酶液 . 粗酶液加无水 乙醇至 1 %浓度后用 0 . 20 和 殖主养鱼类 , 由于草鱼的养殖大都以投喂配