解脲脲原体感染对大鼠生殖细胞的影响及干预治疗的研究-病原生物学专业论文.docxVIP

PAGE PAGE 1 解脲脲原体感染对大鼠生殖细胞的影响及干预治疗的研究 中文摘要 目的：探讨解脲脲原体(Ureaplasma urealyticum，UU)对生殖细胞的影响及抗生 素治疗对解脲脲原体感染的作用。为探讨 UU 导致男性不育的机制提供依据及为 临床治疗男性不育提供新思路。 方法： (1) 选用清洁级成年 SD 大鼠，随机分为对照组、7 天组、14 天组和治疗组，对 照组 24 只大鼠，其余各组 12 只。7 天组、14 天组和治疗组每只大鼠经膀胱注射 0.6ml 的 107CCU/ml UU 菌液，对照组给予等体积的 UU 液体培养基。治疗组于 注射后第七天给予美满霉素灌胃治疗。对照组和 7 天组于注射后 7 天，对照组、 14 天组和治疗组于注射后 14 天，分别用 20%乌拉坦麻醉大鼠后打开腹腔，获取 血液及睾丸组织进行研究。 (2) 用电子天平称取大鼠左右侧睾丸的重量。 (3) 提取各组睾丸组织 DNA，经 PCR 扩增 UU 特异性的脲酶基因片段，琼脂糖 电泳检测。 (4) 各组睾丸组织用 Bouin’s 固定液固定 16~18 小时，HE 染色观察睾丸组织病理 变化；TUNEL 法检测细胞凋亡；免疫组化法检测凋亡蛋白 Bak、Bax、FasL。 (5) 用化学发光法检测各组大鼠血浆及睾丸间质液中睾酮水平。 (6) 各组睾丸组织用 2%戊二醛固定 2 小时以上，透射电镜观察睾丸生精细胞的 超微结构。 结果： (1) UU 感染后，在 7 天组、14 天组和治疗组大鼠的睾丸组织中检测到 UU 特异 性脲酶基因片段，而对照组未见。 (2) UU 感染 7 天组大鼠的睾丸重量稍低于其它各组，然而各组间睾丸的重量并 无统计学意义。 (3) HE 染色显示 7 天组和 14 天组大鼠的睾丸组织呈炎症性病理变化，曲细精管 生精细胞层次和数量减少，基底膜破坏，炎细胞浸润，成熟精子减少，但 14 天 组睾丸组织炎症性病变较 7 天组轻，而治疗组睾丸组织结构接近正常。 (4) UU感染后，7 天组大鼠睾丸间质液中睾酮水平明显低于其它各组(P0.01)， 14 天组、治疗组和对照组之间睾酮水平无统计学意义。 (5) UU 感染后，7 天组和 14 天组大鼠血浆中睾酮水平明显低于对照组和治疗组 (P0.01)，14 天组血浆中睾酮水平高于 7 天组(P0.05)。 (6) TUNEL 法检测发现，7 天组、14 天组和治疗组大鼠生精细胞凋亡率较对照 组明显升高(P0.01)；与治疗组相比，7 天组和 14 天组生精细胞凋亡率均明显升 高(P0.01)，且 7 天组生精细胞凋亡率明显高于 14 天组(P0.01)。 (7) 透射电镜检测发现，UU 感染 7 天组和 14 天组生精细胞的细胞核染色质出现 浓缩、聚集化等凋亡表现，7 天组生精细胞核膜皱缩，细胞核破裂，14 天组细胞 核染色质浓缩、聚集化有减轻的趋势。治疗组生精细胞形态结构较为完整。 (8) 免疫组化检测大鼠睾丸组织的凋亡蛋白 Bak、Bax、FasL 发现：7 天组、14 天组和治疗组 Bak 蛋白均较对照组明显升高(P0.01)，且 7 天组和 14 天组 Bak 蛋白表达均高于治疗组(P0.01 或 P0.05)；与对照组和治疗组相比，7 天组和 14 天组 Bax 蛋白表达均明显升高(P0.01)，且 7 天组明显高于 14 天组(P0.05)； 与对照组相比，7 天组、 14 天组和治疗组 FasL 蛋白表达均升高(P0.01 或 P0.05)，但 7 天组和 14 天组的 FasL 蛋白表达高于治疗组(P0.01 或 P0.05)， 且 7 天组明显高于 14 天组(P0.01)。 结论： (1) UU 感染可导致大鼠睾丸组织出现病理性改变。 (2) UU 感染可导致大鼠睾丸组织生精细胞的细胞凋亡率及凋亡蛋白表达升高， 表明 UU 感染能够诱导生精细胞发生凋亡。 (3) UU 感染可降低大鼠睾丸间质液及血浆中睾酮水平，表明 UU 感染可能与男 性不育有关。 (4) UU 感染后经抗生素干预治疗有助于减轻睾丸组织炎症性病理损伤，减少生 精细胞的凋亡和提高睾酮水平。 关键词：解脲脲原体；生精细胞；凋亡；睾酮 Study on the influence of Ureaplasma urealyticum infection on spermatogenic cells and the intervention treatment in rats Abstract Objective: To study on the influence of ureaplasma urealyticum