解偶联蛋白（UCPs）与肥胖关系研究及UCP4基因在脂肪细胞中的功能探讨-儿科学专业论文.docxVIP

南京医科大学博士学位论文脂肪、骨骼肌、肝脏等组织中均有表达，且呈现在饮食性肥胖大鼠腹 南京医科大学博士学位论文 脂肪、骨骼肌、肝脏等组织中均有表达，且呈现在饮食性肥胖大鼠腹 膜后脂肪组织中表达显著下调的特征，而在遗传性肥胖小鼠仅脑组织 中表达有显著变化，,tAN探讨了UCPs的多组织表达，并证实UCP4 基因不仅在脑组织中有表达而且也存在于脂肪组织中，于饮食诱导性 肥胖大鼠、遗传性肥胖小鼠两种模型具有不同的多组织表达特征．其 中，UCP4基因在饮食性肥胖大鼠腹膜后脂肪组织中表达显著下调的 研究结果，为深入开展该基因在脂肪组织中的功能研究提供了理论依 据。 在此基础上，本文第二部分进一步以3T3一L1脂肪细胞为研究对 象，通过构建UCP4基因表达载体、转染3T3．L1前体脂肪细胞株， 观察UCP4基因过表达对3T3-L1细胞增殖、凋亡、分化、脂质形成 及葡萄糖摄取功能的影响，初步探讨UCP4在脂肪细胞中的功能，以 分析该基因与肥胖发生发展的关系． 以MDI方案诱导脂肪前体细胞3T3．LI向成熟脂肪分化，应用油 红O染色脂滴，结果发现，UCP4基因过表达可显著抑制3T3-L1细 胞的分化，与对照相比，脂滴不但出现晚，而且在分化的同一时间点 其细胞内的脂滴也较小．进一步应用RT-PCR技术检测细胞分化过程 中脂肪细胞的标志基因(C／EBP 0【、PPARY、LPL、AP2，FAS)的 表达，结果发现UCP4基因过表达可显著抑制脂肪细胞分化的进程， 3T3．L1细胞中上述标志基因均表达下调。 已知在正常脂肪细胞分化进程中，于诱导分化第八天约95％脂 肪细胞成为成熟的脂肪细胞。为观察UCP4基因过表达对脂肪细胞脂 质积聚的影响，本文进一步收集诱导分化第8天的脂肪细胞，并测定 胞内甘油三酯含量，结果发现UCP4基因过表达可显著降低3T3．L1 脂肪细胞中甘油三酯的含量，提示UCP4基因具有影响脂质积聚的功 南京医科大学博士学位论文能。 南京医科大学博士学位论文 能。 采用MTT法检测脂肪细胞增殖、流式细胞仪检测脂肪细胞周期， 结果发现UCP4基因过表达可显著促进3T3．L1脂肪细胞增殖，与对 照相比，UCP4基因过表达可显著增加S期3T3．L1脂肪细胞数，提 示UCP4基因还具有促进脂肪细胞增殖、调节细胞周期等功能。 以血清饥硪诱导3T3．L1细胞凋亡，并应用AnnexinV-FITC方法 检测细胞凋亡率，结果发现UCP4基因过表达可显著抑制3T3一L1脂 肪细胞的凋亡，其细胞凋亡率较对照明显减少，提示UCP4基因对 3T3-L1的细胞凋亡有保护作用． 进一步应用3H标记的2-脱氧葡萄糖(2-Deoxy-glucose)检测成 熟脂肪细胞的葡萄糖摄取率，结果发现UCP4基因过表达可显著降低 成熟脂肪细胞的葡萄糖摄取率，其脂肪细胞基础葡萄糖摄取率．胰岛 素刺激后的葡萄糖摄取率较对照均显著降低。更进一步采用RT-PCR 技术检测成熟脂肪细胞中的GLUTl、GLUT4基因表达，结果发现 UCP4基因稳定转染的3T3．L1脂肪细胞株中GLUTl、GLUT4基因的 表达较对照均明显下调，提示UCP4基因可能通过影响GLUTs基因 的表达而改变脂肪细胞的葡萄糖摄取率，UCP4基因还具有影响胰岛 素敏感性的功能。 本研究的创新之处在于：(1)本研究首次应用两种肥胖动 物模型(饮食诱导、遗传)，在整体水平上揭示了UCPs家族各 个成员的多组织表达特征；(2)再次证实UCP4基因除表达于脑 组织外，腹膜后脂肪、骨骼肌、肝脏等组织中均有表达，并首次 南京医科大学博士学位论文发现UCP4基因在饮食性肥胖大鼠腹膜后脂肪组织中呈现表达 南京医科大学博士学位论文 发现UCP4基因在饮食性肥胖大鼠腹膜后脂肪组织中呈现表达 显著下调的特征，而在遗传性肥胖小鼠中仅脑组织表达有显著变 化；(3)针对UCP4在脂肪细胞中的功能进行研究，首次发现 UCP4基因能够抑制脂肪细胞分化，抑制脂质积聚，首次发现 UCP4基因具有促进脂肪细胞增殖，抑制脂肪细胞凋亡的作用， 首次发现UCP4基因还具有抑制成熟脂肪细胞葡萄糖摄取的功 能．从而为UCP4基因作为肥胖防治靶标提供了初步的理论依 据． 关键词：肥胖；解偶联蛋白(UCPs)；饮食诱导；ob／ob；能量代谢； 脂肪前体细胞3T3-L1；脂肪细胞分化；细胞增殖；细胞凋 亡；葡萄糖摄取 南京医科大学博士学位论文ABSTRACT 南京医科大学博士学位论文 ABSTRACT Obesity，one of the common metabolic diseases，call be the important risk factor for many severe diseases，such as diabetes， hypertension，