界面光散射分析技术的开发及其在生化和药物分析中的应用研究-分析化学专业论文.docxVIP

内容摘要界面光散射分析技术的开发及其在生化和 内容摘要 界面光散射分析技术的开发及其在生化和 药物分析中的应用 学科专业：分析化学 研究方向：生物光化学分析 指导教师：黄承志教授 研究生：陆巍(2000224) 内容摘要 、oastemack等于20世纪90年代初提出的共振光散射∞$onan∞light scatterin＆ RLS)技术是一项借助普通荧光分光光度计灵敏检测聚集体光散射信号的分析技 术。RLS技术因其操作简便并有力克服了传统光散射技术灵敏度低和仪器条件要 求严格的缺点而迅速引起了诸多研究者的浓厚兴趣和广泛关注．从1996年到现在 短短的7年间，RLS技术已经广泛和成功地应用于生物大分子和药物的分析研究 领域。这些研究发现，与测定生物大分子和药物常常采用的吸光光度法和荧光光 度法相％RLS技术除了能获得更高灵敏度的优点外，还具有探针范围更广泛的 优势q／ 本文分别以与蛋白质作用后既无明显颜色又无显著荧光性质变化的阴离子表 面活性剂十二烷基苯磷酸钠(sodium dodeeyl benzene sulfonate,SDBS)和酸性三苯 甲烷染料水溶性苯胺蓝(water blue，WB)为例，成功建立了能简单，快速和灵敏地 分析蛋白质的RLS方法，从而进一步证明了RLS技术在拓展分析探针方面的独特 优势。 一(在pi-ii．98，离子强度为o．001时，十二烷基苯磺酸钠(sodium dodecyl benzene sulfon‘ate．SDBS)的RLS信号能被蛋白质强烈增强，其最大散射蜂位于470．0 nlTl。 增强的ILLS信号与蛋白质浓度在一定范围内成正比，该方法分析蛋白质的检测限 小于58．1 ng／mi。该方法成功地应用于合成样和尿样中蛋白质的分析。 在pH2．09，离子强度为O．001时，水溶性苯胺蓝(water blue，WB)的RLS信号 能被蛋白质强烈增强，其最大散射峰位于346．0蛳。增强的RLS信号与蛋白质浓 度在一定范围内成正比，该方法分析蛋白质的检测限小于1．5 ng／ml。该方法成功 地应用于合成样和尿样中蛋白质的分析。 虽然RLS技术具有上述的优点，但依然存在着一些不足之处．例如，RLS技 术还不能把待分析物的光散射信号与其共存物质的光散射信号区分开来。这就在 很大程度上限制了RLS技术选择性的进一步提高。为了弥补RLS技术的不足，近 来，我们把RLS技术与液，液界面(1iquid／liquid interface)上的全内反射光(total hatemal reflection light)相结合，成功地开发出了全内反射共振光散射(total internal retiected i℃sorlance light scattering．TIR-RLS)技术：～种通过检测液，液界面上的RLS 硬南颤蓖大学硕士论文 硬南颤蓖大学硕士论文 界面光敬瓣分橱技术的嚣发厦其在生他秘药物分辑串的应搦 信譬的变化檄行待分析物梭测的界面光散射技术finterracial light scattering technique)。在该授术中，待分析物通过与就它试剂结合形成双亲复合物(amphiphilic species)瑟吸雅夜液，液界瑶上。这样，在幽入射光于渡／液界面全反射蝣在界面上形 袋黪溺渍失渡(evanescent wave)豹激发下，泼双亲复合秘缝产生显蓑增强豹RLS镶 号。由于待分析物通过形成双亲复合物而吸附在液／液界面上．故很好达到了与其 共存物质相分离的目的。因此，TIR-RLS技术能进一步提高RLS技术的选择性。 附机3里(synergistic adsorption mechanism)和共吸附机}里(coadsorption mechanism)，分 别袋髑Eu(III)．三辛基氧纯麟(trioctylphosphine oxide,TOPO)、罗丹骥B(rhodamine B，RhB)．滇记十六烷基三甲铵(cetyltrimethylammonium bromide，CTMAB)和吖睫 橙(acrindine orange，AO)．溴化十六烷基三甲铵(cetyltrimethylammonium bromide， CTMAB)与核酸作用以及分别采用阴离子袭面活性剂十二烷基苯磺酸钠细dium dodecyl benzene sutfonate，SDBS)、卡二靛纂蕊酸钠(sodium dodeeylsulfonate，SDS) 和十二烷基磺酸钠(sodium lauryl sulfate,SLS