阿魏酸酯酶A的基因克隆与表达及其水解产物的纯化-微生物学报.PDF

生 物 工 程 学 报 曾妍 等/ 阿魏酸酯酶A 的基因克隆与表达及其水解产物的纯化 425 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn March 25, 2014, 30(3): 425−434 DOI: 10.13345/j.cjb.130377 ©2014 Chin J Biotech, All rights reserved 工业生物技术 A 1 1 2 3 3 曾妍 ，龚燕燕 ，邬敏辰 ，殷欣 ，唐存多 1 214122 2 214122 3 214122 , , , . A . , 2014, 30(3): 425−434. Zeng Y, Gong YY, Wu MC, et al. Gene cloning, expression of a feruloyl esterase A and purification of its hydrolysis products. Chin J Biotech, 2014, 30(3): 425−434. 摘 要: 为在毕赤酵母中表达来源于米曲霉Aspergillus oryzae 的A 型阿魏酸酯酶并研究其水解功能，探讨大孔 树脂对其水解产物阿魏酸的纯化条件及纯化效果，以米曲霉A. oryzae CICC 40186 总RNA 为模板，通过RT-PCR 技术克隆出了米曲霉阿魏酸酯酶A (AorFaeA) 成熟肽的编码基因AorfaeA ，并借助pPIC9K 质粒实现了其在毕赤 酵母GS115 中的异源表达。SDS分析结果显示纯化后的重组阿魏酸酯酶 (reAorFaeA) 为单一条带，其表 观分子质量约 39.0 kDa 。以阿魏酸甲酯为底物，经高效液相色谱法测得该酶的最高酶活为 58.35 U/mg 。利用 reAorFaeA 和木聚糖酶复合酶水解去淀粉麦麸制备阿魏酸，用大孔树脂纯化小麦麸皮阿魏酸粗提液，所测树脂中 HPD-300 型大孔树脂的吸附量和解吸率较高，以50%的乙醇为洗脱液，当流速为1.0 mL/min 时洗脱效果较好。 在该纯化条件下，阿魏酸的回收率为 92% ，质量分数由原材料中的0.13 ％富集提高到10.55%。这些研究为阿魏 酸的酶法“绿色生产”及应用奠定了坚实的理论基础。 : 米曲霉，阿魏酸酯酶A ，克隆表达，阿魏酸，纯化 Received: July 25, 2013; Accepted: December 17, 2013 Supported by: National Natural Science Foundation of China (No.. Corresponding author: Minchen Wu. Tel/Fax: +86-510 E-mail: biowmc@126.com (No. 2014-02-24 /kcms/doi/10.13345/j.cjb.130377.html 426 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech March 25, 2014 Vol.30 No.3 Gene cloning, expression of a feruloyl esterase A and purification of its hydrolysis products 1 1 2 3 3 Yan Zeng , Yanyan Gong , Mi