课件：补体检测及应用.ppt

3、方法评价与临床意义 方法简便、快速，但敏感性低，补体的活性除与反应体积成反比外，还与反应所用的缓冲液、SRBC的数量以及反应温度都有关。 CH50增高见于： 心肌梗死、甲状腺炎、大叶性肺炎、糖尿病、妊娠等 CH50降低见于： 严重肝病或不良时营养、细菌感染 自身免疫病的诊断及动态检测 第二节 补体组分的检测 常作为单个补体成分的检测指标：C3、C4、C1q、B因子和C1酯酶抑制物等 测定方法： 活性测定~免疫溶血法 含量测定~免疫化学法（自动化免疫散射比浊法） 免疫溶血法 定义:是根据补体参与介导抗体溶细胞作用的级联效应特征建立的单一补体成分检测法 指示系统:以SRBC-抗SRBC为激活物和指示系统 参照体系:以人为设计的缺乏某种补体成分的血清为参照 结果判度:若有溶血发生，表明待检标本存在参照血清所缺乏的补体成分，且溶血程度与此补体成分的量呈正比，仍以50％溶血为终点 免疫溶血法试验原理 溶血反应指示系统 实验参照系统的补体 待测血清中的补体 选用先天缺乏待测补体成分的动物或人的血清 通过利用化学试剂人为灭活正常血清中待测补体成分从而来制备缺乏该补体成分的补体试剂 与CH50试验中的SRBC和溶血素一样，在有完整补体系统存在时，SRBC发生溶解。 + 结果 表明待测血清中含有待测的补体成分，其活性则由溶血程度来衡量 表明待测血清中也不含有有待测的补体成分 溶血及溶血程度 不溶血 R试剂 参照血清常称之“R（remove）”试剂，即去除某种补体成分之意。已能筛选到的血清有人C2缺乏、豚鼠C4缺乏、小鼠C5缺乏和家兔C6缺乏的血清 免疫溶血法常用于C2、C3、C4、C5、C6等补体成分的检测。其中以C3、C4两成分的检测更为常见 第三节 补体结合试验 补体结合试验(complement fixation test，CFT ) 是指在补体的参与下，以绵羊红细胞（SRBC）和溶血素（抗SRBC的抗体）作为指示系统的用已知抗原或抗体检测相应未知抗体或抗原。 一、试验原理 包括两个系统五种成分： 待检系统：已知Ag或Ab、待检Ab或Ag及仅供一组Ag-Ab系统反应的定量补体。 指示系统：绵羊红细胞和溶血素。 Ag 待测血清 Ab 阳性 No Ab 阴性 Ag Ag Ag 二、方法： 1 2 3 4 5 试验管 血清 对照管 抗原 对照管 补体 对照管 SRBC 对照管 待测血清 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.4mL 0.8mL 抗原 补体 N.S 摇匀，37℃，水浴15min 溶血素 SRBC 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL 0.2mL … … … … … … … … … … … … … … … … … … 摇匀，37℃，水浴15min 预期结果： 管内液体混浊呈浅红色为不溶血，管内液体透明呈红色为溶血。 溶血 不溶血 2. 试验管 血清对照管 抗原对照管 补体对照管 SRBC对照管 ？ 溶血 溶血 溶血 不溶血 （1）补体的滴定 管号 1:60补体 缓冲液 溶血素 放置 37 ℃水浴 30 min 致敏SRBC 放置 37 ℃水浴 30 min 结果 1 0.04 0.26 0.10 0.20 不溶血 2 0.06 0.24 0.10 0.20 不溶血 3 0.08 0.22 0.10 0.20 微溶血 4 0.10 0.20 0.10 0.20 微溶血 5 0.12 0.18 0.10 0.20 全溶血 6 0.14 0.16 0.10 0.20 全溶血 1个实用单位：能产生完全溶血的最小补体量。 正式试验中使用2个实用单位 三、技术要点 2、已知抗原或抗体的滴定：通过CFT试验 抗原 抗体 对照 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 1:128 1:256 1:512 1:4 4 4 4 4 4 4 3 2 0 1:8 4 4 4 4 4 3 2 1 0 1:16 4 4 4 4 3 3 2 0 0 1:32 4 4 4 4 3 2 1 0 0 1:64 4 4 4 4 2 1 0 0 0 1:128 4 2 1 0 0 0 0 0 0 1:256 3 1 0 0 0 0 0 0 0 1:512 0 0 0 0 0 0 0 0 0 对照 0 0 0 0 0 0 0 0 0 抗原和抗体效价的方阵滴定 1:64的抗原作为一个单位 1:32的抗体作为一个单位 2~4个单位，即1:32~ 1:16 4个单位，即 1:8 正式试验 最好：采集血标本后及时分离血清并尽快检测 保存：-20 ℃，检测不同时采集