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流式细胞术在临床血液学中的应用 云南省第一人民医院 欧阳红梅 2007-07 流式细胞术的基本概念 流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快速、准确、客观，并且同时检测单个微粒（通常是细胞）的多项特性的技术，同时可以对特定群体加以分选 研究对象为生物颗粒，如各种细胞、微生物及人工合成微球等 研究的微粒特性包括多种物理及生物学特征，并加以定量 流式细胞仪的结构及工作原理 散射光信号和荧光信号 前向角散射光（FSC, Forward Scatter） 入射激光的前向散射光信号 细胞相对大小及其表面积 侧向角散射光（SSC, Side Scatter） 入射激光90?角的散射光信号 细胞粒度及细胞内相对复杂性 荧光素与特异抗体结合，荧光抗体与细胞抗原结合越多，产生的荧光信号越强。 流式细胞术在白血病免疫分型中的应用 白血病免疫分型 FAB主要依据形态学和细胞化学进行分型。 MIC方案在FAB方案基础上结合了免疫学和细胞遗传学。（M：形态学 I：免疫学 C：细胞遗传学） 免疫分型与FAB的关系 FAB分型受检查者的主观因素影响大，符合率有一定限制。 免疫标志能够提供正常细胞在演变成恶性肿瘤过程中细胞基因及抗原标志发生变化的信息，而这种变化常常是细微的，以至于常规FAB方法不能分辨。 免疫分型是MIC的重要组成部分，它是对FAB分型的补充。 属于同一种FAB型的病例，可能具有不同的免疫表型。 免疫表型在AML和ALL上与FAB的不一致并不减低免疫分型在白血病患者的应用价值，相反，免疫表型使我们对血液肿瘤细胞的生物学特征有了更深入和更精确的认识。 免疫表型对肿瘤的诊断、治疗策略的制定、预后判断及肿瘤发病机制的研究都具有重要作用。 免疫分型的两个阶段 根据白血病细胞表达的系列相关抗原，确定其系列来源。如：淋系T/B、粒单系、红系、巨核系等。 根据白血病细胞表达的系列分化其相关抗原进一步分型。如：早前B，前B，普通B… 正常骨髓CD45/SS散点图 急性白血病的四大免疫类型 单表型急性白血病 表达某一个系列抗原为主的急性白血病 双表型/双克隆急性白血病 未分化型急性白血病 EGIL，1998年白血病积分系统 分值 B系 T系 髓系 2 CD79a CD3 MPO (cyt)CD22 TCRα/β (cyt)IgM TCRγ/δ 1 CD19 CD2 CD117 CD20 CD5 CD13 CD10 CD8 CD33 CD10 CD65 0.5 TdT TdT CD14 CD24 CD7 CD15 CD1a CD64 *当髓系和一个淋系积分均2分时，则诊断为急性混合细胞型白血病。 急性白血病的免疫学系列分型 类 型 系 列 积 分 B系 T系 粒单系 巨核系 红系 1.单表型 纯B-ALL 2 0 0 0 0 纯T-ALL 0 2 0 0 0 纯AML 0 0 2