课件：培养基适用性验证.ppt

致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 培养基适用性验证 大肠埃希菌 金黄色葡萄球菌（ 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis ) 白色念珠菌 (Candida albicans) 黑曲霉 (Aspergillus niger )　 备料单（菌落计数） 一、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、枯草芽孢杆菌 营养琼脂培养基200ml、*3 0.9%无菌氯化钠溶液100ml*3 平皿10套*3 1ml移液管9支*3、10ml移液管2支*3 试管7支*3 二、白色念珠菌、黑曲霉 玫瑰红钠200ml、*2 0.9%无菌氯化钠溶液100ml*2 平皿10套*2 1ml移液管9支*3、10ml移液管2支*2 试管7支*2 菌液制备 1）金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌菌液的制备 接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，30℃、159r/min摇床培养24h做①代，上述培养物24h后接1ml至新鲜营养肉汤培养基中30℃、159r/min摇床培养24h做②代 4）白色念珠菌菌液的制备 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基, 30℃150r/min培养24小时，做①代，上述培养物24h后接1ml至新鲜改良马丁培养基中30℃、159r/min摇床培养24h做②代 5）黑曲霉菌液的制备 接种黑曲霉的新鲜培养物于改良马丁培养基上, 30℃、150\min培养2天 4.2 适用性检查 4.2.1 试验步骤 a．菌液制备：按稀释度10-5,10-6,10-7等依次类推稀释菌悬液，接种培养后取50～100cfu计数。接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基上；至硫乙醇酸盐流体培养基中，30~35℃，培养18~24小时；接种白色念株菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上25~28℃，培养24~48小时，上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml 含菌数为50~100CFU的菌悬液，备用。接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，23~28℃，培养5~7天，加入3-5ml0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，吸出孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能通过滤菌丝的无菌巴氏吸管）至无菌试管内，用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含孢子数50～100cfu的孢子悬液。菌液制备后在室温2h内使用，在2~8℃可再24h内使用。 b．适用性检查：接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾入营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备3个平皿，混匀，凝固，置30~35℃培养48h，计数；取白色念珠菌、黑曲霉各50-100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，每株试验菌平行制备3个平皿，混匀，凝固，置23~28℃培养72h，计数。同时，用相应的对照培养基替代被检培养基进行上述试验。 结果判定：若被检培养基上得菌落平均数不小于对照培养基上得菌落平均数的70%，且菌落形态大小与对照培养基上得菌落一致，判改培养基的适用性检查符合规定。 4.2.2 验证方法 验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算个试验菌每次试验的回收率。 a．平皿法计数时，取试验可能用的最低稀释级供试液1ml和50～100cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。薄膜过率法计数时，取规定量试验可能用的最低稀释剂供试液，过滤，冲洗，在最后一次的冲洗液中加入50～100cfu试验菌，过滤，按薄膜过滤法测定其菌数。 b．菌液组??测定所加的试验菌数。?c．供试品对照组 取规定量的供试液，按菌落计数方法测定供试品本底菌数。 d．稀释剂对照组??若供试液制备需要分散、乳化，中和、离心或薄膜过滤等 待处理时，应增加稀释剂对照组，以考察供试液替代供试验品，加入试验菌，使最终菌浓度为每1ml供试液含50～100cfu，按试验组的供试液制备方法和菌落计数方法测定其菌数。? 表1 微生物验证方法 组数 加样 加样量（mL） 回收率（%） 是否 合格 试验组 供试液+菌液 1 菌液组 菌液 供试品对照组 供试液 稀释剂对照组 稀释液+菌液 e．结果判断??在3次独立的平行试验中。 稀释剂对照组的平均菌落数 稀释剂对照的菌回收率= ×100% 菌液组的平均菌落数 试验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数 时间 阴性对照 结论 金黄色葡萄球菌 枯草芽孢杆菌 菌种类型 培养基 培养条件 温度 铜绿假单胞 白色念珠菌 黑曲霉 检