课件：外周血、骨髓染色体教材.ppt

外周血、骨髓染色体培养和制片中的注意事项 第一篇：细胞遗传学的基本知识： 引言： 细胞遗传学的形成和发展： 1910年澳地利学者摩尔根在果蝇中发现了性锁 遗传规律；1925年他又发表了《基因论》；1955年，美籍华人徐道觉首先发现了哺乳动物细胞低渗染色体制备法，为医学遗传学的发展奠定了基础；1970年，卡斯伯森发现了人类染色体的分带技术。 基本知识1： 一、细胞遗传学时期： 该时期大致是在1910—1940年，这一时期通过对遗传学规律和染色体行为的研究，确立了遗传的染色体学说。 二、什么是染色体的行为： 它是指在细胞周期中，染色体在形态和结构方面所表现出的一糸列有规律性的变化。这种变化对于生物的遗传和变异，起着很重要的作用。 基本知识2： 3、染色体是细胞核内满载遗传信息编码的重要物质，它是由DNA、组蛋白、非组蛋白和少量的RNA所组成的一种核蛋白复合体。从DNA到染色体要经过四级结构的构型变化，它们分别是：核小体、螺线体、超螺线体和染色体。 基本知识3： 染色体组型： 即根据每种生物染色体的数目、大小和形态等特征，借助显微照相技术，将单个细胞内的同源染色体剪下、依次配对和分组排列，这就构成了该个体的染色体组型或核型。由于细胞在有丝分裂的中期，其染色体的形态最为典型，故此，通常把细胞分裂的中期，作为识别染色体的个体性和研究染色体组型的最佳时期。 基本知识4： 染色体带型： 染色体经过一定程序的处理并用特定的染料染色之后，在普通在光镜或荧光镜下，染色体可显示出不同深浅颜色的条纹或不同强度的荧光区带，这种区带就称之为染色体带。染色体上染色体带的形态表现，就称之为染色体带型。这种显示染色体带的过程，就称之为染色体显带。  第二篇：培养过程中的注意事项 注意事项（一）： 器皿的清洗是整个实验的关键性的第一步 1、玻璃器皿的清洗 新的玻璃器皿先用清水冲干净，再在清洁剂（如洗衣粉、洗洁 精等）溶液中，用毛刷彻底刷干净，然后清水冲净。晾干。再用5-10%HCL（浓HCL原液浓度约36%）泡过夜后，冲净烘干，再泡入清洗液中24小时（注意泡入的器皿内不能有气泡），再用清水彻底冲净，然后用蒸馏水冲净（普通器皿冲五遍），用作细胞培养的器（如 培养瓶等）蒸馏水冲净后，再用三蒸水冲两遍以上，烘干。用纯棉布或无毒的硬纸包裹，高压高温灭菌备用。旧的玻璃仪器的清洗，可免去中间用5-10%HCL浸泡过夜这一步骤，其余的处理方法仍要保留。 2： 载玻片的清洗处理 把玻片逐片用皂粉液洗刷干净（用粗纱布刷，不要用毛刷），然后用 自来水彻底冲净后，晾干。逐片放入清洗液中浸泡 24小时，取出后用自 来水彻底冲净，泡蒸馏水一天，取出放入盛有80%乙醇的容器。（带密 封盖）内保存备用 *玻片的清洁直接影响染色体铺展、形态及背景的清晰； 玻片之间粘在一起时，密封程度高，皂液和清洗液无法 浸入，故要逐片浸入。 注意事项（二） 细胞培养中的有关知识 全血中含有红、白细胞二类，它们均是处于未分裂的间期细胞。红细胞没有核 无分裂能力；白细胞虽有细胞核存在，但是在外周血中已处于休止期，因此要使白细 胞从间期进入分裂期必须加刺激药物现在。最常用的促使分裂的药品是PHA，它能使 白细胞中的淋巴细胞和单核细胞转化为具有分裂作用 的母细胞，染色体只有在细胞分 裂时才能出现具有一定的形态，这样才便于我们识别。此外，染色体的形态在细胞分 裂中期时最典型的，所以在培养过 程中还需用秋水仙素类药物，这种药物可以破坏细 胞分裂过程中纺锤丝的形成，使细胞分裂停止于中期，由于秋水仙素的作用破坏了纺 锤丝的形成，造成了染色体着丝粒不能分开，但染色体的两臂却在S期时已复制了，这 就构成了染色体的形态为“X”形或“∧”形，称之为中期染色体图形。为了便于观察和 计数，因而在制作过程中还需采用低渗处理，低渗处理的目的在于使细 胞膨胀，细胞 膜破裂，染色体分散，这样可便于分析 一、培养中应注意的问题1： 1、 标本中的抗凝剂: 标本中的抗凝剂常采用的是肝素，肝素是一种多 糖，能阻止白细胞和淋巴细胞与红细胞集结在一起而 影响培养的质量，但肝素浓度太高会导致溶血，同时也 可抑制淋巴细胞的转化。一般剂量是100单位肝素液 可抗凝5毫升血液。 培养中应注意的问题2： 培养基中的PH值： 培养基中的红色来自成分中的酚红，因为它的变色范围较适合作 培养基的酸碱度指示剂。它在PH≥7时，颜色由红变深