实验七酵母RNA的提取及鉴定.doc

  1. 1、本文档共9页,可阅读全部内容。
  2. 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
  3. 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载
  4. 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
word整理版 学习好帮手 姓名:郭沈杰 年级专业:2012级生物科学 同组者:蔡萍萍 学号:12050011012 实验七 酵母RNA的提取及鉴定 一、实验目的 掌握稀碱法提取酵母RNA的原理和方法。 二、实验原理 酵母核酸中RNA含量较多,DNA含量则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,有此可得粗RNA制品。 用碱液提取的RNA有不同程度的降解。 三、实验仪器 1、离心机 2、水浴锅 3、电炉 4、烧杯 5、量筒 6、移液管 7、玻璃棒 8、滤纸 9、漏斗 10、试剂瓶 11、电子天平 12、pH试纸(pH1~14) 四、实验试剂 1、干酵母粉 2、0.2%氢氧化钠溶液:2g氢氧化钠溶于蒸馏水并稀释至1000ml。 3、乙酸(A.R.) 4、95%乙醇 无水乙醚(A.R.) 6、10%硫酸:浓硫酸(比重1.84)10ml,缓缓倾于水中,稀释至100ml。 7、氨水(A.R.) 8、5%硝酸银溶液:5g硝酸银溶于蒸馏水并稀释至100ml,贮于棕色瓶中。 五、实验步骤 (一)RNA的提取: 1、称取2g干酵母粉于100ml烧杯中,加入0.2%氢氧化钠溶液10ml,沸水浴加热30分钟,经常搅拌(如沸水浴过程中溶液蒸干可再加5~8ml氢氧化钠)。冷却,然后加入乙酸数滴,使提取液呈酸性(pH试纸检验,pH5~6),离心10-15分钟(4000r.p.m)。 倒取上清液,加入2倍体积的95%乙醇,边加边搅,加毕,静置,待完全沉淀,过滤。 2、滤渣先用95%乙醇洗2次,每次约5毫升,再用无水乙醚洗2次,每次也约5ml。 3、洗涤时可小心地用玻璃棒搅动沉淀。乙醚滤干后,滤渣即为粗RNA,可鉴定和测定含量用。 (二)鉴定: 1、取上述RNA约0.5g,加10%硫酸5ml,加热至沸1~2分钟,将RNA水解。 2、水解液2ml,加入氨水2ml和5%硝酸银溶液1ml,观察是否产生絮状嘌呤银化合物。 注意事项: 1、离心管回收 2、离心的时候,要两两对称放置,且离心管中溶液的量基本一样。否则会遭成离心机转子的损坏。 六、实验结果 (一)RNA的提取: 加入乙酸使溶液呈酸性,溶液呈土黄色。 进行离心后,沉淀沉于离心管的下部,上半部分上清液呈土黄色。 取上清液,加入2倍体积的95%乙醇后,溶液呈现白色浑浊状 完全浑浊后,上清液呈白色,沉淀为白色。 过滤洗涤后,得RNA粗品。 (二)鉴定: (1)水解后,溶液呈无色透明状。 加入氨水后,溶液仍澄清,溶液中似有油状物质产生。 加入硝酸银后,仍似有油状物质产生。 一段时间后,产生白色絮状沉淀。 (2)取水解液0.5ml,加苔黑酚—三氯化铁试剂1ml,加热至沸1min,观察颜色变化 七、实验分析 称取干酵母粉:2.0096g 最后得到的RNA粗品:0.034 g RNA提取率(%)=RNA质量(g)/干酵母粉质量(g)x100% 本实验中RNA提取率(%)= 0.0346 g / 2.0096g = 1.722% (稀碱法提取的RNA为变性RNA) 本实验为定性实验,提取酵母中的RNA中,产生白色沉淀时可能因副反应产生的其他沉淀,即最终的沉淀中可能混有其他杂质,不适于进行定量测定。 依据:酵母细胞富含核酸,且核酸主要是RNA,含量为干菌体的2.67%~10.0%,而DNA含量较少,仅为0.03%~0.516%。为此提取RNA多以酵母为原料。工业上制备RNA多选用低成本、适于大规模操作的稀碱法或浓盐法。这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA,主要用作制备单核苷酸的原料,其工艺比较简单。 八、实验注意事项 1. 过滤时, 洗涤不能带水, 否则沉淀粘在滤纸上取不下来。 2. 有时絮状沉淀出现较慢, 可放十多分钟。 3. 利用等电点控制RNA析出时,应严格控pH。 4. 稀碱法提取的RNA为变性RNA,可用于RNA组分鉴定及单核苷酸制备,不能作为RNA生物活性实验材料。 九、思考题 1、简述核酸分离纯化的一般原则。 保持核算一级结构的完整性; 尽量排除其他分子的污染,保持核酸纯度。 2、RNA提取过程中的关键步骤及注意事项有哪些? 过滤时,洗涤不能带水,否则沉淀粘在滤纸上取不下来; 有时絮状沉淀出现较慢,可放十多分钟; 利用等电点控制RNA析出时,应严格控制pH; 稀碱法提取的rna为变性rna,可用于单核苷酸制备,不能作为rna生物活性材料。

文档评论(0)

xfnzn + 关注
实名认证
内容提供者

该用户很懒,什么也没介绍

1亿VIP精品文档

相关文档