实验五（原虫1阿米巴、利什曼原虫 贾第虫、隐孢子虫.pptVIP

实 验 五 （原虫1） 阿米巴、利什曼原虫 贾第虫、隐孢子虫 掌握: 溶组织阿米巴滋养体和包囊的形态特征； 利什曼原虫无鞭毛体； 隐孢子虫卵囊； 贾第虫滋养体的镜下形态特征； 各种常见原虫实验诊断方法。 熟悉: 利什曼前鞭毛体形态； 阿米巴和贾第虫的包囊碘液涂片染色的方法。 实验内容 溶组织内阿米巴（Eatamoeba histolytica） 又称痢疾阿米巴，寄生于结肠和其他组织内，引起阿米巴病。其生活史中具有滋养体和包囊两种形态。 一、形态 1、滋养体： 形态变化大，大小为10-60μm，具有侵袭性。 活体时伸出伪足作活泼的变形运动-阿米巴动。 滋养体内外质分明，外质薄而透明，内质呈颗粒状，可见被吞噬的红细胞和食物泡，具一个圆形的泡状核。胞核直径4-7μm，核膜薄，其内缘有单层排列、大小一致的核周染色质粒，核仁细小，居中，核仁与核膜之间隐约可见网状的核纤丝。 滋养体 包囊 滋养体（铁苏木素染色） 包囊呈无色透明的圆球体，直径10-16μm，胞质内可呈棒状的糖原泡和拟染色体（营养储存结构）。囊壁厚，囊内有泡状细胞核，四核包囊为成熟包囊（感染期）。 碘染：呈棕黄色球形小体，可见核及核仁，胞质内可见棕色的糖原泡及透明的拟染色体。 铁苏木素染色：包囊呈黑蓝色，核结构清晰。 二、实验诊断 病原学检查： 稀便：急性期稀便或脓血便中查滋养体，采用生理盐水涂片法（注意事项：保温、防止尿液污染、及时送检） 成形粪便：碘液染色检查包囊 脓肿穿刺液涂片查滋养体 免疫诊断： 杜氏利什曼原虫（Leishmania） 利什曼原虫的生活史有前鞭毛体和无鞭毛体2个时期，前者寄生于昆虫（白蛉）消化道内；后者寄生于脊椎动物（如人、犬）单核吞噬细胞内。 一、形态 又称利杜体，椭圆形或圆形，常见于Mφ。 染色后，核较大，圆形，呈紫红色或红色，胞质蓝色。 内含有一个细小杆状的动基体，位于核旁。 动基体之前有一个点状基体，由此发出一条根丝体。 寄生于白蛉消化道内，成熟虫体呈梭形. 核位于中部，动基体在虫体前端，基体在动基体之前. 由基体发出1根鞭毛游离于体外，鞭毛摆动活泼. 二、实验诊断 1、病原诊断：常用方法 （1）穿刺涂片检查：骨髓穿刺原虫检出率为80～90%， （2）培养法：将穿刺物接种于NNN培养基，置22～250C温箱内，1周后查见运动活泼的前鞭毛体则可确诊。 （3）动物接种法，将穿刺物接种于敏感动物，1-2月后取其肝、脾作涂片，染色镜检。 （4）皮肤组织检查法： 2、免疫诊断：用于个例辅助诊断或流行病学调查。 （1）血清抗体检测： （2）循环抗原检测。 3、DNA诊断：PCR和分子杂交。 一、形态 1、滋养体： 形似纵切的半个梨形，前端钝圆，后端渐变尖细，大小为9～21μm×5～15μm，两侧对称，背面隆起，腹面扁平。 腹面的前部向内凹陷而成吸盘，滋养体借此吸附于肠粘膜上。 铁苏木素染色 经铁苏木素染色后，可见吸盘背侧胞质内有2个圆形泡状核。两核之间2条纵贯虫体的轴柱，其前端有基体，为鞭毛发源处，其中部有1对半月形的中体。 虫体有4对鞭毛，按伸出部位分别称为前鞭毛，后鞭毛，腹鞭毛和尾鞭毛。 铁苏木素染色 2、包囊： 包囊椭圆形，囊壁较厚，大小为8-14μm×7～10μm。 碘液染色后呈虫体黄绿色或灰蓝色，囊壁与虫体之间有明显空隙，核多偏于一端，数目2-4个，囊内可见轴柱，鞭毛。 铁苏木素染色后，虫体呈蓝黑色，囊壁透明，囊内结构清晰可辨。 1、病原学诊断： （1）粪便检查，为本病首选检查方法 对腹泻者，用NS直接涂片法查活动的滋养体；对成形粪便，用碘液染色法查包囊。包囊形成有间歇，故检查时应隔日1次并连续3次以上送检为宜。 （2）十二指肠液或胆汁检查： （3）小肠活组织检查，利用纤维胃镜取小肠粘膜组织进行压片或切片染色检查滋养体。 * * 实验目的和要求 示教内容（显微镜下）： (a) 利什曼前鞭毛体和无鞭毛体； (b) 蓝氏贾第虫滋养体和包囊 ； (c) 隐孢子虫卵囊； 观察内容：溶组织阿米巴滋养体和包囊；贾第虫滋养体和包囊（铁苏木术染色）；利什曼无鞭毛体和前鞭毛体（吉氏染色）；隐孢子虫卵囊（改良抗酸染色）。 操作内容：介绍淋巴结或者骨髓穿刺检查无鞭毛体 碘液涂片染色检查溶组织阿米巴的包囊； 电教：溶组织内阿米巴 作业：1、绘蓝第虫滋养体、溶组织阿米巴滋养体和包囊、黑热病原虫前鞭毛体。 2、溶组织阿米巴