蛋白质印迹法westernblot工应用介绍.pptVIP

威斯腾生物技术中心 2014.9.1 蛋白质印迹法 （western blot技术） Western Blot介绍 Western Blot一般流程 Western Blot常见问题分析 Western Blot 介绍 蛋白质印迹的发明者一般认为是美国斯坦福大学的乔治·斯塔克（George Stark）。在尼尔·伯奈特（Neal Burnette）于1981年所著的《分析生物化学》（Analytical Biochemistry）中首次被称为Western Blot。 蛋白免疫印迹( Western Blot) 是将电泳分离后的细胞或组织总蛋白质从凝胶转移到固相支持物NC膜或PVDF 膜上，然后用特异性抗体检测某特定抗原的一种蛋白质检测技术，现己广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等多个方面。 Western Blot流程 （1）贴壁细胞蛋白样品收集 A 收集培养瓶或六孔板中的培养液转移至离心管中。 B 加入PBS冲洗2-3遍，再将PBS转移至离心管中，离心收集细胞。 C 将细胞培养瓶或六孔板置于冰上，然后将离心好的离心管中的液体小心倾尽并放置于冰中，加入含PMSF的RIPA裂解液200μl于离心管中并移至对应的培养瓶中，摇晃培养瓶使裂解液与贴壁的细胞充分接触，冰上裂解30min。