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第三章 细胞培养的基  本方法 教学目的和要求：2学时 重点和难点： 掌握细胞培养中无菌操作技术及操作过程中需要注意哪些问题； 预防污染是无菌操作的关键。 第一节 无菌操作技术 组织培养中最重要的，也是最基本的要求就是各项操作均应从无毒害、无污染的培养环境来考虑。培养基、器皿材料、接种工具、操作环境、培养室和超净工作台等各个环节都应注意。 （二）无菌操作室，工作前后室内清扫、拖地，以防菌在空气中流动，特别真菌孢子。使用前，室内及超净工作台紫外灯杀菌30分钟，超净工作台酒精（75%）杀菌，工作中一直吹风。 三、洗手和着装 工作服、帽子、口罩； 洗手 4、进行操作时动作要准确敏捷，但是不宜太快，防止空气流动，增加污染的机会； 5、超净工作台上的器具和用品要摆放合理； 6、操作时器具不能触及瓶口以防止污染； 7、不要说话 五、使用超净台注意事项 1、超净台安装在清洁无尘的房间内，最好为隔离的无菌间，以免尘土过多易使滤器阻塞，降低净化效果，缩短使用寿命； 2、长期未使用或新安装的超净台使用前必须对工作台和周围环境进行清扫，再采用化学灭菌或紫外线灭菌法进行灭菌处理； 3、使用前用75％酒精擦洗台面，并提前用紫外线灭菌30min。关闭紫外灯后应启动鼓风机运转几分钟后再进行培养操作； 4、净化工作区不应存放不必要的物品，以保持洁净气流型不受干扰； 5、用后工作台要用75％酒精