冰岛硫化叶菌β-1内切葡聚糖酶的同源表达-华中农业大学学报.PDF

第 卷 第 期 华 中 农 业 大 学 学 报 30 6 Vol.30 No.6 年 月 , 2011 12 JournalofHuazhon A riculturalUniversit Dec.2011674~679 g g y 冰岛硫化叶菌 1,4 内切葡聚糖酶的 β- - 、 同源表达 纯化与性质 朱 泾 赵述淼 彭 楠 梁运祥 / , 华中农业大学生命科学技术学院 农业微生物学国家重点实验室 武汉 430070 摘要 利用 技术从冰岛硫化叶菌( ) 中分别扩增得到带有和不带有信号 PCR SulolobusislandicusREY15A f , ( ), , 肽编码序列的 -14-内切葡聚糖酶基因 S.islandicuseng 将其克隆至硫化叶菌表达载体 pZC2中 构建重组表 β , ( )。 达载体 和 并转化至 重组菌株经 阿拉伯 ZC2-en YS ZC2-en WS S.islandicusE233S△ rEF△lacS D- p g- p g- py , ( ) , 。 糖诱导后 细胞破碎上清经镍离子金属鳌合亲和层析介质 NiNTA 柱纯化 得到重组蛋白 SDS结果表 - : ( ) , ( ) ; 明 不带有信号肽的葡聚糖酶 分子质量为 带有信号肽的分子质量 为 酶学性质 ENG-W 41ku ENG-SP 43ku , / , , 。 分析表明前者没有酶活性 后者酶活力为 最适反应温度为 最适 为 耐热性试验结果 103.4U L 90℃ pH 4.0 2+ : 。 : 表明 在 90℃保温 60min后酶活力稳定在最高酶活力的40%以上 金属离子