1株大分子有机物降解菌的分离、鉴定及酶学分析-江苏农业科学.PDFVIP

— ２６８— 江苏农业科学　２０１７年第４５卷第５期 杜东霞，汪　彬．１株大分子有机物降解菌的分离、鉴定及酶学分析［Ｊ］．江苏农业科学，２０１７，４５（５）：２６８－２７０． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１７．０５．０７０ １株大分子有机物降解菌的分离、鉴定及酶学分析 杜东霞，汪　彬 （湖南省微生物研究院，湖南长沙４１０００９） 　　摘要：通过平板培养法从高温堆肥中分离筛选出１株高温高效大分子有机物降解菌Ｗ－１０。Ｗ－１０具有同时分 解纤维素、蛋白质和淀粉等大分子有机物的能力。该菌株的生长特性表明，在ｐＨ值为５．０、温度为５０℃时，羧甲基纤 维素酶（ＣＭＣａｓｅ）、蛋白酶、－淀粉酶的酶活性达到最高值，分别为１４４．７５、９７．５１、８３．８５Ｕ／ｍＬ。将测得的１６ＳｒＤＮＡ α 基因序列在ＮＣＢＩ数据库中进行同源性比对，综合形态特征和１６ＳｒＤＮＡ基因序列同源性分析，将该菌株初步鉴定为 芽孢杆菌属。 　　关键词：高温堆肥；大分子有机物；芽孢杆菌属；Ｗ－１０ 　　中图分类号：Ｘ１７２　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１７）０５－０２６８－０３ ［３－５］ 　　我国是农业大国，年产各类秸秆约８．０亿ｔ，占世界秸秆 研究具有重要的意义 。 总量的１／５左右。这些秸秆除了一部分用于饲料、造纸、纺织 本研究从堆肥中筛选出能够高效降解纤维素、蛋白质和淀 和燃料加工外，其余均作为农业废弃物丢弃或就地焚烧，不仅 粉的高温菌株，并对其酶活性进行测定，目的在于为高效降解 ［１－２］ 浪费了宝贵的资源，同时也污染了生存环境 。 大分子有机物菌株的选育和相关酶制剂开发提供菌种资源。 通过高温堆肥降解农业废弃物是资源化利用的良好途径 １　材料与方法 之一。高温堆肥是一种利用各种微生物高温高效降解有机废 弃物，并产生稳定的最终产物的过程。高温堆肥可有效促进 １．１　试验材料 纤维素废弃物的资源化利用，并降低农业废弃物对环境的污 １．１．１　样品采集　猪粪、城市生活垃圾及秸秆自然堆肥，堆 染。在堆肥发酵过程中，为缩短发酵周期及提高堆肥质量，以 体温度上升到５５℃时，采集中层样品于无菌器皿中，４℃保 人为方式添加一些高温微生物，高温微生物产生的热稳定酶 存备用。 可将基质中的纤维素及木质素分解，并产生大量的能量和热 １．１．２　培养基　（１）分离初筛培养基：牛肉膏蛋白胨培养 量，不仅可以将农业废弃物转化为有机肥，而且可以有效抑制 基：牛肉膏５．０ｇ／Ｌ，蛋白胨１０．０ｇ／Ｌ，ＮａＣｌ５．０ｇ／Ｌ，水１．０Ｌ， 堆肥中有害病原菌的 生。在堆肥基质中，除了纤维素外，还 ｐＨ值为７．２～７．４。 有其他蛋白质及糖类的存在，应深入研究并充分利用高温微 （２）大分子有机物降解复筛培养基．羟甲基纤维素钠培 生物对纤维素、蛋白质及糖类等大分子有机物的降解作用，加 养基（ＣＭＣ－Ｎａ培养基）：ＣＭＣ－Ｎａ１５ｇ／Ｌ、（ＮＨ）ＳＯ ４ ２ ４ 速农业废弃物转化为有机肥。因此，开展堆肥高温微生物的 ２．０ｇ／Ｌ、ＫＨＰＯ ０．５ｇ／Ｌ、ＫＨＰＯ２．０ｇ／Ｌ、ＭｇＳＯ ·７ＨＯ ２ ４ ２ ４