卵母细胞品质和培养液组成分对孤雌激活猪胚及体细胞复制猪胚发育.DOCVIP

卵母細胞品質和培養液組成分對孤雌激活豬胚及體細胞複製豬胚發育能力之影響 Effects of Oocyte Quality and Medium Components on the Development of Parthenogenetic and Cloned Porcine Embryos 研究生： HYPERLINK /cgi-bin/cdrfb3/gsweb.cgi?ccd=_OjgVTo=s%E6%BD%98%E7%A7%80%E6%95%8F.auc \o 潘秀敏 潘秀敏 HYPERLINK /cgi-bin/cdrfb3/gsweb.cgi?ccd=_OjgVTo=sHsiu-Min+Pan.aue \o Hsiu-Min Pan Hsiu-Min Pan 指導教授： HYPERLINK /cgi-bin/cdrfb3/gsweb.cgi?ccd=_OjgVTo=s%E6%B2%88%E6%9C%8B%E5%BF%97.adc \o 沈朋志 沈朋志 HYPERLINK /cgi-bin/cdrfb3/gsweb.cgi?ccd=_OjgVTo=sPerng-Chih+Shen.ade \o Perng-Chih Shen Perng-Chih Shen 【摘要】 本研究旨在探討卵母細胞生長期別及培養液中組成分對孤雌激活豬卵母細胞及複製豬胚激活後發育能力之影響。於試驗一係評估利用亮鉀酚藍（brilliant cresyl blue, BCB）染色所篩選已達完全生長期卵母細胞之發育能力，及探討胚培養液成分對孤雌激活豬卵母細胞發育能力之影響。結果顯示，孤雌激活豬卵母細胞經PZM-3培養液培養後之分裂率（97.0 vs. 82.6%）與囊胚率（61.8 vs. 32.8%）皆顯著高於培養於NCSU-23培養液組者（P 0.05）。然而，利用含13 μM BCB培養液染色呈藍色之未成熟豬卵母細胞，經體外成熟培養後之成熟率（77.2 vs. 78.0%）及激活後之囊胚率（26.8 vs. 25.6%），均與未染色之對照組卵母細胞者相近（P 0.05），但若BCB之濃度增加為26 μM時，則其成熟率反之顯著下降（63.2%）（P 0.05）。此外，在評估移除部份細胞質對豬卵母細胞於孤雌激活後之體外發育效率時則發現，未去卵質之激活豬卵母細胞的體外囊胚率顯著高於去卵質組之激活豬卵母細胞者（44.5 vs. 19.9%；P 0.05）；惟於未去卵質（36.7 ~ 56.3%）與去卵質（12.9 ~26.7%）組間之激活豬卵母細胞，不論培養於PZM-3液或另添加PVA或sorbitol或PVA ＋ sorbitol者之體外囊胚率於組內之各處理組別間均無顯著差異（P 0.05）。 於試驗二乃評估供核細胞及複製胚經去乙醯化抑制劑（trichostatin A, TSA）培養後，其複製豬胚之後續發育能力。結果顯示，經含40 nM TSA培養之供核細胞所產製複製豬胚之卵裂率（66.8 vs. 32.5%）及發育至四細胞期之百分比（53.4 vs. 14.0%），皆顯著高於未經TSA處理之供核細胞所產製之對照組複製胚者（P 0.05）；惟若培養供核細胞之TSA濃度增加至80 nM時，則各胚期之發育率均與對照組者相近（P 0.05）。進一步探討TSA應用於複製豬胚發育中之合適添加時機的結果顯示，無論單獨於供核細胞培養過程或/和胚培養液中給予TSA之處理，各處理組複製豬胚於體外發育至各胚期之效率均無顯著差異（P 0.05）。綜合上述結果說明，相較於NCSU-23培養液而言，利用PZM-3培養液進行孤雌激活豬卵母細胞之體外培養，可得更佳之體外囊胚率；而應用BCB染色以獲得達完全生長期卵母細胞，及在體外培養液中添加PVA或/和Sorbitol之策略，似無助於孤雌激活豬卵母細胞之體外發育能力；惟供核細胞經40 nM TSA培養後，確實能提升由之所生產複製豬胚之早期發育能力。 關鍵字： HYPERLINK /cgi-bin/cdrfb3/gsweb.cgi?ccd=_OjgVTo=sTrichostatin+A.kwc \o Trichostatin A Trichostatin A、 HYPERLINK /cgi-bin/cdrfb3/gsweb.cgi?ccd=_OjgVTo=sBrilliant+cresyl+blue.kwc \o Brilliant cresyl blue Brilliant cresyl blue、 HYPERLINK /cgi-bin/cdrfb3/gsweb.cgi?ccd=_OjgVTo=s%E5%9F%B9%E9%A4%8A%E6%B6%B2%E6%88%90%E5%88%86.kwc \o