细胞活力测定.pptxVIP

荧光细胞化学测定及细胞活力的测定 实验目的 学习荧光显微镜的使用 了解荧光显微技术原理和方法 以及荧光技术在细胞化学方面的应用 荧光显微技术 利用短波光照射物质，激发其发射荧光在荧光显微镜下可以检视的方法 自发荧光、次生荧光 指有些生物体受到短波光照射后，直接发出的荧光 生物材料受到短波光照射后并不发光，当它吸附荧光染料后产生荧光 实验原理 实验用品 材料： 洋葱 新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆原生质体悬液，人口腔上皮细胞 用品： 荧光显微镜，载玻片，镊子，烧杯 荧光显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，烧杯，牙签 试剂： (1) O.01％ 吖啶橙生理盐水溶液 (2) O.02％ 异硫氰酯荧光素生理盐水溶液 (3) O.Ol％ 罗丹明生理盐水溶液 (4) 荧光增白剂溶液，将荧光增白剂溶于0.4M山梨醇溶液中，使浓度达到0.1％。 试剂： 1．二丙酸酯荧光素溶液：取l0mg二丙酸荧光素于5ml丙酮中，将此溶液逐滴加入5ml PH5-6生理盐水或0.65M的甘露醇溶液中，直到出现永久性乳白沉淀为止。 2．0.01％吖啶橙的生理盐水溶液 利用荧光增白剂观察植物细胞壁 实验方法 5 / 12 实验方法 6 / 12 DNA分布的观察 实验方法 7 / 12 蛋白质分布的观察 实验方法 8 / 12 线粒体观察 二丙酸酯荧光素是非荧光性的亲酯性化合物; 进入细胞活力较强细胞内,细胞内活酯酶,将二丙酸酯荧光素的荧光素分解 在荧光显微镜下发出黄绿荧光 9 / 12 实验方法 细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞活力的测定 实验方法 细胞二丙酸酯荧光素分解酶的活性及细胞活力的测定 新鲜紫鸭趾草花粉或蚕豆表皮 加二丙酸酯荧光素溶液一滴5-lO分钟 荧光显微镜下观察 收集观察 用无细胞和无染料的培养液洗二次 离心收集 染色液数滴直接加入细胞培养液 悬浮细胞 细胞经吖啶橙染色 活细胞核呈黄绿色或亮绿色荧光 细胞质为淡红色 11 / 12 实验方法 吖啶橙鉴定细胞死活 实验方法 吖啶橙鉴定细胞死活 口腔粘膜上皮细胞 滴加1-2滴0.01％吖啶橙生理盐水溶液 染色5分钟后于荧光显微镜下观察 谢谢