不同时间电刺激对C2C12细胞糖代谢的影响研究-华南师范大学学报.PDF

华南师范大学学报 （自然科学版） ２０１３年１１月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＯＵＴＨＣＨＩＮＡＮＯＲＭＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ 第４５卷第６期 　　　　　　　　　　　 Ｎｏｖ．２０１３ 　　　　　　　　　　　 （ＮＡＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥＥＤＩＴＩＯＮ） 　Ｖｏｌ．４５　Ｎｏ．６ 文章编号：１０００－５４６３（２０１３）０６－０１５５－０６ 不同时间电刺激对 Ｃ２Ｃ１２细胞糖代谢的影响研究  徐晓阳 ，闫旭杰，周　周，潘红英，赵秀峰 （华南师范大学体育科学学院，广东广州５１０６３１） 摘要：以小鼠骨骼肌母细胞（Ｃ２Ｃ１２）肌管为研究对象，测定不同时间电刺激对其ＡＭＰＫ、ＨＫ 、ＧＳ１基因表达、 Ⅱ ＧＬＵＴ４基因及蛋白表达等糖转运和代谢相关指标的变化，探讨不同收缩时间对骨骼肌细胞糖代谢的影响及机制．骨 骼肌细胞的肌糖原消耗随刺激时间延长而增加，为了保证骨骼肌细胞糖消耗的需要，通过ＡＭＰＫ信号通路的调控， 其膜对胞外糖转运的能力会随收缩时间延长而增强；骨骼肌细胞内糖原合成酶的合成则随肌糖原储量的持续下降 而增加． 关键词：骨骼肌细胞；电刺激；糖代谢；信号转导 中图分类号：Ｇ８０４．７　　　文献标志码：Ａ　　　ｄｏｉ：１０．６０５４／ｊ．ｊｓｃｎｕｎ．２０１３．０９．０２１ 　　糖是骨骼肌细胞收缩的重要能量来源，多数运 １．２　分组及电刺激方式 动项目的完成都离不开糖供能，而体内糖供能的能 将培养细胞分为对照组（Ｃ组）、电刺激６０ｍｉｎ 力则决定了运动员的运动成绩．因此，糖的大量消 组（Ｅ６０组）、电刺激 １２０ｍｉｎ组（Ｅ１２０）．用美国 耗也是导致这些运动项目运动性疲劳的重要原 ＧＲＡＳＳ公司生产的Ｓ４８双向脉冲电刺激器进行电 ［１］ 刺激，设定电压１５Ｖ，频率３Ｈｚ，脉宽３０ｍｓ．刺激 因 ．骨骼肌细胞收缩将引起胞内糖原的大量消 ［２］ 结束后，即刻收样，测定各指标． 耗 ．但对骨骼肌细胞在收缩过程中糖原消耗调控 机制的信号传导，以及肌糖元消耗和合成平衡调控 １．３　指标的测定 的机制不清楚．在体研究干扰因素多，取材周期 １．３．１　糖原含量的测定　肌管糖原含量用南京建 长，对研究结果有一定的影响．本文利用小鼠骨骼 成肌糖原及肝糖原蒽酮法测定试剂盒测定． 肌母细胞（Ｃ２Ｃ１２）作为研究对象，研究不同时间电 １．３．２　ＧＬＵＴ４蛋白含量的测定　ＧＬＵＴ４蛋白含量 的测定采用武汉优尔生公司的小鼠ＧＬＵＴ４酶联免疫 刺激对其中糖原含量、ＡＭＰＫ １和 ２、ＨＫ ＧＳ α α Ⅱ 分析试剂盒测定，各指标监测严格按照试剂盒说明操 １ｍＲＮＡ的表达、葡萄糖转运载体４（ＧＬＵＴ４）ｍＲＮＡ 作．用酶标仪在４５０ｎｍ波长下依序测量各孔的吸光 的表达及其蛋白含量的变化． 度（ＯＤ值），通过标准曲线计算ＧＬＵＴ４蛋白含量． １．３．３　ＡＭＰＫ １和 ２、ＨＫ 、ＧＳ１、ＧＬＵＴ４ｍＲＮＡ １　材料与方法