苹果酸含量的测定苹果酸含量.docx

学生姓名： 学 号： 专 业： 应用化学 年级班级： 12级C班 课程名称： 现代仪器分析实验 实验时间： 2015年4月24日 实验设计题目 用HPLC对苹果中苹果酸含量和研究方法的测定 设计者姓 名 所属系、年级、专业 化学系12级分析检测 指 导 老 师 预计字数： 开题日期： 实验目的 （1）：进一步了解高效液相色谱仪的组成及各组件的功能。 （2）：加深了解外标法的定量原理以及外标法校正曲线的制作。 （3）：熟悉紫外检测器的特点和使用方法。 实验方案的设计； 高效液相色谱分析法： 今年来，随着高效液相色谱分析法的广泛应用，最近也已应用于有机物质的分离与测定，此法只需对样品进行离心或简单预处理，而不需要太多的分离处理手续，操作十分简单，其他组分的干扰少。高效液相色谱法最初用于有机物质分析时，采用强阴，阳离子交换色谱树脂的 通 离子排斥和分配色谱分离有机物质，以示差折光检测器或紫外分光检测器检测。最近由 键 料在HPLC上的应用，使得采用C18等反相柱分离食品中有机物质。高效液相色谱法 A原理： 称校正曲线法。色谱分析中，在相同的操作下，用已知纯样品配成不同浓度的标准溶液进行试验，测量各种浓度下对应的峰高和峰面积，用峰高或峰面积对浓度做出标准曲线。样品分析时，将相同体积的分析样品进样，从色谱图上求出待测组分的峰高或峰面积，根据标准曲线查出样品中待测组分的含量。 B试剂： 市售的苹果、苹果酸为标准品、甲醇和磷酸为色谱纯、磷酸二氢钾为分析纯、实验室用水为二次蒸馏水。 C仪器： 日本岛津公司的高效液相色谱仪，并与之配置的高压梯度泵、手动进样器、柱温箱、检测器、离心机。 D果实中有机酸的提起： 将果实样品破碎除籽后研磨成粉状，之后准确称取1.000g样品，加入含0.008mol／L磷酸的蒸馏水25ml,在25摄氏度的水浴中震荡浸泡10min，然后在800r／min、4摄氏度的条件下离心20min，取上清液，用0.45pm的水系滤膜过滤后用与HPLC分析。 色谱条件： C18色谱柱 、紫外检测器 有机酸定量方法： 定量：采用峰面积外标法。 讨论与分析： A流动相成分的选择： 磷酸盐—磷酸体系是反相高效液相色谱法中常用的缓冲盐，常用的磷酸盐有KH2PO4，NH4H2PO4和NaH2PO4.本实验比较了流动相0.01mol／L（Ph=2.75）的KH2PO4和NH4H2PO4对有机酸色谱分离效果的影响，发现它们均可将各种有机酸有效分开，然而全波长扫描显示在紫外区KH2PO4。溶液本身的吸收值要比NH4H2PO4低，检测结果干扰较小，在210nm处，它们的吸收值分别为0.025和0.047，因此本实验选择KH2PO4。缓冲盐作为流动相。由于过高的缓冲盐对于泵和色谱柱容易造成损害，影响柱子的使用寿命，在本实验中流速为1ml/min，温度为25℃,用全波分析,采用0.02mol／L,PH=2.75(用盐酸调节至PH为2.75)的 KH2PO4低浓度（所占体积95%）的缓冲盐，并加以适量的纯甲醇（所占体积5%），以改善有机酸分离效果和峰形。 研究方法： 目前，检测有机酸的方法有分光光度法，薄层色谱法，气相色谱法，液相色谱法。分光光度法以有机酸和一些特定物质的反应机理，能够生成在一定波长下的最大吸收峰的有色物质。但该法易受其他物质的干扰，通常需要将提取液进行沉淀，离子交换树脂等前处理纯化，因此步骤繁琐。气相色谱法的灵敏度和选择性相对较好，但是由于主要的短链有机酸是非挥发性酸，需要将有机酸衍生化，步骤较为繁琐，且常因为发生生化反应不易定量而直接影响检测结果的准确性，因而使气相色谱法的应用受到限制。高效液相色谱法是目前普遍采用的分析有机酸的方法，常用的反相高效液相色谱法（RT-HPLC）和离子交换色谱法。这两种方法中前者是用C18色谱柱，后者是用离子交换树脂柱。高效液相色谱法现广泛应用于 蔬及其制品中有机酸含量的测定。 数据处理 1.溶液配制： 0.008mol／L 磷酸的蒸馏水 的配制： 磷酸（H3PO4.M=98） 将磷酸溶液用蒸馏水稀释到1000ml的容量瓶中，是其浓度变为0.008mol／L磷酸的蒸馏水。 计算：磷酸分析纯的浓度CH3PO4=500*1.69*85%/98=7.32mol／L 有公式C1V1=C2V2得0.008mol／L*1L=7.32mol／L*V2 需要磷酸分析纯的体积V2=1ML 苹果酸表液 的配 制： 苹