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实验一 坐骨神经-腓肠肌标本的制备
实验原理:
蛙类的一些基本生命活动和生理功能与哺乳动物有相似之处,且其离体组织器官的生活条件较为简单,易于掌握,因此在生理学实验中常用蛙类的坐骨神经-腓肠肌标本来观察神经肌肉的兴奋性和肌肉收缩特点。
双毁髓成功的标志:彻底捣毁脊髓时,可看到动物的后肢突然蹬直,而后瘫软如棉,此时的动物为双毁髓动物。如动物仍表现四肢肌肉紧张或活动自如,必须重新毁髓
任氏液是0.65%的生理盐水。
制备完整的坐骨神经-腓肠肌标本应包括:连有坐骨神经的脊椎、坐骨神经、腓肠肌、股骨头或胫腓骨头四部分。
直流电刺激可兴奋细胞时之所以使细胞产生兴奋,从根本上讲是电刺激改变了细胞原来膜内外之间的电位差。细胞的静息膜电位为外正内负,如果刺激使膜电位差值减小,即去极化,细胞则兴奋;如果使膜电位差值增大(超级化),细胞则兴奋性降低(抑制)。因此在细胞膜外使用直流电刺激细胞,通电时兴奋只发生在负极,正极的兴奋性下降,在持续通电期间不形成刺激;断电时产生反向电流,兴奋只发生在正极;通电的刺激强度大于断电。
实验步骤:
1、破坏脑和脊髓
将头部抬起,在离吻端约1.5cm 处的背部皮肤会形成V 形皱褶,V 形皱褶中心的皮肤下方为枕骨大孔。
2、剪去躯干上部及内脏,分离后肢。
3、剥皮。
4、分离两腿。
5、分离坐骨神经。
从肱二头肌和半膜肌中间分离坐骨神经,剪断细小神经。
6、分离腓肠肌。
7、分离股骨。
刮净股骨上的肌肉,在距膝关节约1cm处剪断股骨。
8、分离膝关节以下部分。
9、检查标本兴奋性。
用手术镊轻轻提起标本的脊椎片,使神经离开玻璃板。再用经任氏液蘸湿的锌铜弓,将其两级接触神经,如腓肠肌发生迅速收缩,则表示标本机能正常。
注意事项:
1、双毁髓时应注意使蟾蜍头部前俯,防止耳后腺分泌物射入实验者眼内,如被射入,应立即用清水冲洗眼睛。
2、尽量减少神经与金属器械及污染物接触。(?)
金属因为有电子的移动会刺激神经。
3、避免过度牵拉和压迫神经。
4、分离神经时一定要将周围组织剥离干净。
5、要常用任氏液浸润标本,防止干燥,勿用清水冲洗。
6、分离肌肉时要按层进行,不要乱剪。
思考题:
为何锌铜弓刺激神经会引起肌肉收缩?
锌铜弓在溶液中沾湿以后,锌的表面电离出正离子,里面形成负离子;而铜的表明电离出负离子,里面形成正离子。当锌铜弓接触活组织时,电流便沿着锌片→活组织→铜片的方向流动而产生刺激效应。所以锌相当于正极,而铜相当于负极发挥刺激作用。当断开时,则发生相反的效应。
实验二 刺激强度与收缩反应的关系;骨骼肌的单收缩与强直收缩
实验目的:
1、学习神经-肌肉实验的电刺激方法
2、观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系
3、记录单收缩与强直收缩
基本原理非常重要!!!
阈强度/阈值/阈刺激:引起肌肉收缩反应所需的最小刺激强度。
阈下刺激:刺激强度小于阈值的刺激,不引起肌肉发生收缩反应。
阈上刺激:刺激强度大于阈值的刺激。
最适刺激:引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度。
(名词解释!!!)
单收缩:肌肉组织对于一个阈上强度的刺激,发生一次迅速的收缩反应。一般经过潜伏期、收缩期和舒张期三个时期。
从刺激开始到收缩开始这一段无明显外部表现的时间,即为潜伏期。这是兴奋的产生、传导和传递以及兴奋-收缩耦联所耗费的时间。
由潜伏期末到肌肉开始收缩到收缩达到高峰,是肌肉长度缩短或张力增加的时间,曲线较陡,称为收缩期。
从收缩高峰开始,曲线较缓慢地下降至基线,是长度或张力恢复过程,称为舒张期。
受到连续单刺激时,肌肉能够发生强直收缩。
不完全强直收缩:后一收缩发生在前一收缩的舒张期。
完全强直收缩:后一收缩发生在前一收缩的收缩期内,各收缩不能分开,肌肉维持稳定的收缩状态。
如果刺激间隔大于单收缩的时程,肌肉则出现两个分离的单收缩;如果刺激间隔小于单收缩的过程而大于不应期,则出现两个收缩反应的重叠,即收缩的总和;但如果第二个刺激在第一个收缩反应的不应期内,则第二个刺激不产生收缩反应。
实验步骤:
1、坐骨神经-腓肠肌标本的制备;
2、将标本置于屏蔽盒内,坐骨神经放在刺激电极上,结扎肌腱的棉线与张力换能器相连,此连线不宜太紧或太松,并应与桌面垂直。
3、连接装置和计算机采集系统;
4、刺激观察。
①刺激强度对肌肉收缩幅度的影响
1)刺激方式用单刺激,刺激强度初始值设为0.01-0.05V,增量0.005V,然后采样;
2)将刺激强度逐步增大,记录阈刺激和最适刺激强度数值。
②刺激频率对肌肉收缩形式的影响
1)选用单刺激,用刚能引起最大收缩的刺激强度采样,刺激间隔时间大于肌肉收缩时程,记录肌肉的单收缩张力曲线;
2)逐渐增加刺激频率,观察肌肉收缩形式的变化,记录出现不完全强直收缩和完全强直收缩时的刺激频率。
注意事项
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