生物化学试验东北大学生命科学与健康学院.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 五、结果与计算——实验数据记录表 用各管平均A值（吸光度）绘制标准曲线图 测定次数 各管A值（吸光度） 1 2 3 4 5 6 1 2 3 平均值 五、结果与计算 把在标准曲线上查得的NaNO2含量代入正式计算硝酸还原酶活性： NR活性[NaNO2 (μg)/鲜重(g)?小时]＝ 式中稀释倍数对于活体法，指酶促反应液体积（10 mL）与显色取用体积（2mL）之比，即等于5。 附注： （1）无机磷对硝酸还原酶活力有促进作用，因此常用磷酸缓冲液。 （2）活体法酶促反应在暗条件下进行，以防光照下叶绿体形成还原型铁氧还蛋白，促使亚硝酸还原酶把NO2还原成NH3。 （3）提取缓冲液中加入半胱氨酸为的是保护酶分子中的巯基使之不易失活。 1．测定硝酸还原酶依据的原理什么？ 2．测定硝酸还原酶的材料为什么要提前一天施用一定量的硝态氮肥，并且取样应该在晴天进行？ 3．测定硝酸还原酶活性的离体法和活体法各有何特点？ 4．提取缓冲液中为什么加入半胱氨酸？ 思考题： 实验九 凝胶层析法分离提取1,5-二磷酸核酮糖羧化酶 东北大学生命科学与健康学院 一、目的 掌握凝胶层析法原理； 学习用凝胶层析法分离提取1,5-二磷核酮糖羧化酶的操作方法和实验技术。