大肠杆慢菌基因工程.pptVIP

第十四章 大肠杆菌基因工程;四、 基因工程菌的遗传不稳定性及其对策;一、 大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征;一、 大肠杆菌作为表达外源基因受体菌的特征;二、 外源基因在大肠杆菌中高效表达的原理;a. 启动子最佳距离的探测;b. 启动子的筛选;c. 启动子的构建;d. 启动子的可控性;启动子的可控性;启动子的可控性;启动子的可控性;强化转录终止的必要性;强终止子的选择与使用; 外源基因在大肠杆菌细胞中的高效表达不仅取决于转录启动的频率，而且在很大程度上还与mRNA的翻译起始效率密切相关。大肠杆菌细胞中结构不同的mRNA分子具有不同的翻译效率，它们之间的差别有时可高达数百倍。mRNA翻译的起始效率主要由其5‘ 端的结构序列所决定，称为核糖体结合位点（RBS） ;大肠杆菌核糖体结合位点包括下列四个特征结构要素： 位于翻译起始密码子上游的6-8个核苷酸序列5’ UAAGGAGG 3’，即Shine-Dalgarno（SD）序列，它通过识别大肠杆菌核糖体小亚基中的16S rRNA 3’端区域3’ AUUCCUCC 5’并与之专一性结合，将mRNA定位于核糖体上，从而启动翻译； 翻译起始密码子，大肠杆菌绝大部分基因以AUG作为阅读框架的起始位点，但有些基因也使用GUG或UUG作为翻译起始密码子； SD序列与翻译起始密码子之间的距离及碱基组成； 基因编码区5’ 端若干密码子