Identifiler体系在单亲亲权鉴定中的应用分析.DOCVIP

亲子鉴定中Amelogenin基因荧光定量分析检出克氏综合征1例 胡锡阶，刘祖林，章 涛，祁 莹 (563003 贵州 遵义，遵义医学院附属医院贵州省细胞工程重点实验室，法医学鉴定中心) [关键词] 克氏综合征；Amelogenin基因；亲子鉴定 [中图法分类号] [文献标志码] B [通信作者] 胡锡阶，E-mail：xijiehu@ 我鉴定中心在对一亲子鉴定案例进行鉴定分析时发现，其中一份检材的短串连重复序列（short tandem repeat，STR）分型图上性别基因座分型异常，经Amelogenin等位基因XY荧光定量分析,疑为克氏综合征（Klinefelter syndrome）,后经染色体核型分析证实为克氏综合征，现报告如下。 1 对象与方法 1．1 对象 亲子鉴定受检者争议父37岁(实验室编号：2009-0097-1),女孩9岁(实验室编号:2009-0097-2)。 1．2 方法 DNA的提取采用固相法提取，检材为EDTA-K2抗凝静脉血；试剂为Qiagen公司的Generation Capture Column；用美国ABI公司的产品AmpFlSTR? Identifiler?试剂分别对15个STR基因座(D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、TH01、D13S317、D16S539D、2S1338、D19S433、vWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA)和1个性别基因座Amelogenin按技术手册所给条件进行PCR复合扩增，3100 Avant遗传分析仪进行电泳分离，并通过GeneScan Software V3.7软件、Genotyper Software V3.7软件进行DNA的STR基因分型；细胞染色体核型分析为G显带。 2 结果 2.1 亲子关系鉴定结果 本案例常染色体上的15个基因座在STR分型时，有5个基因座不符合孟德尔遗传规律，故可排除亲生血缘关系，其等位基因分型结果见表1。 表1 STR基因分型结果 基因座 争议父(WJ2009-0097-1) 女孩（WJ2009-0097-2) 等位基因1 等位基因2 等位基因1 等位基因2 D8S1179 10 13 10 13 D21S11 30 31 30 30 D7S820 8 11 9 10 CSF1PO 12 12 12 12 D19S433 13 15.2 14 16 VWA 14 17 14 15 TPOX 8 8 8 9 D18S51 14 18 14 14 D3S1358 15 16 15 15 TH01 7 9 9 9 D13S317 8 11 11 12 D16S539 12 13 9 9 D2S1338 20 20 18 23 D5S818 11 11 11 13 FGA 21 24 18 23 Amelogenin* X Y X X *：争议父检样Amelogenin基因座上XY峰的荧光强度严重不均衡 2.2 争议父性别基因座Amelogenin异常表现 Amelogenin基因座上的STR分型及荧光信号强度如图1所示，等位基因XY峰严重不均衡，其峰高比值（较低峰的相对荧光单位除以较高峰的相对荧光单位）和峰面积比值约为50%；而在Ladder（等位基因分型标准物）和性染色体正常男性（2009-0090-1）的STR分型图谱上，Amelogenin基因座上这对等位基因荧光信号强度较为均衡,计算XY的峰高比值和峰面积比值，都在90%以上（表2）。 A：ladder（等位基因分型标准物）Amelogenin基因座上XY的峰高和峰面积；B：争议父（2009-0097-1）Amelogenin基因座上XY的峰高和峰面积；C：正常男性对照（2009-0090-1）Amelogenin基因座上XY的峰高和峰面积 图1 Amelogenin基因座STR分型及荧光标记峰高和峰面积图谱 表2 Amelogenin等位基因X和Y荧光定量分析结果 样本编号 峰高比值（%，Y峰高/X峰高) 峰面积比值（%，Y峰面积/X峰面积) Ladder(等位基因分型标准物) 97.07(199/205) 94.23(1731/1837) WJ2009-0097-1（争议父） 50.44（184/338） 51.54（1988/3857） WJ2009-0090-1（正常男性） 99.03（610/616） 96.03（5861/6041） 2.3 争议父染色体核型分析结果 为验证STR分型图谱荧光信号定量分析疑是克氏综合征的准确性，对争议父加做细胞染色体遗传学分析，证实其G显带核型为47，XXY（图2），也即克氏综合征患者。 图2