生物转换之新机能微生物的育种.DOC

生物轉換之新機能微生物的育種 Breeding of new functional bioconversion microbes 研究生： HYPERLINK .tw/theabs/site/sh/search_result.jsp?hot_query=%E5%9A%B4%E8%94%93field=AU HYPERLINK .tw/theabs/service/search_result.jsp?hot_query=%E9%99%B3%E9%8C%A6%E6%83%A0field=AU 陳錦惠 HYPERLINK .tw/theabs/service/search_result.jsp?hot_query=CHANGCHENGHSUANfield=AU HYPERLINK .tw/theabs/service/search_result.jsp?hot_query=Chin-Hui+Chenfield=AU Chin-Hui Chen 指導教授： HYPERLINK .tw/theabs/service/search_result.jsp?hot_query=%E9%84%A7%E5%BE%B7%E8%B1%90field=AD 鄧德豐 【摘要】 本實驗利用細胞融合技術，以Schizosaccharomyces pombe 的原生質體為主體，分別與植物葉綠體或Monascus anka、Saccharomyces diastaticus、Zymomonas mobilis、Lentinus edodes等之原生質體間進行融合，或將所獲得的酵母融合株再次進行融合，以期能獲得新機能之酵母菌株。由實驗結果所示，以含水量80%之麩皮與木屑比例為1:1.5的培養基，添加0.2~0.3%幾丁質粉末，培養Trichoderma viride 4天後，以90mL含0.6M KCl的50mM磷酸緩衝溶液(pH5.5)來萃取出細胞壁分解酵素，在45?C、50rpm振盪反應，可獲得M. anka、S. diastaticus、L. edodes之原生質體。但若要獲得Z. mobilis的原生質體則是添加300 μg/mL Lysozyme於含有0.8M sucrose為滲透壓穩定劑的細胞壁分解溶液中，在pH7.5、30?C下靜置反應則可獲得。在融合體形成最適條件方面：Schi. pombe原生質體與香菜葉綠體濃度皆為1×108cells/mL，並以1：1的比例混合後，添加適量的PEG溶液，靜置於30?C、反應10min後，置於30?C下厭氣包埋平板培養。結果獲得15株融合株(Fusant)，分別由Schi. pombe原生質體與榕樹、七里香、樟樹、香菜、薄荷、紫蘇等葉綠體融合獲得的Fusant 1、Fusant 2、Fusant 3、 Fusant 4、Fusant 9、Fusant 11、Fusant 12等，或與M. anka原生質體融合獲得Fusant 5、Fusant 6或與Fusant 2的原生質體再融合獲得Fusant 7，或與S. diastaticus的原生質體融合獲得Fusant 8，或與紅蘿蔔原生質體融合獲得Fusant 10，以及Saccharomyces cercvisiae 20581與Fusant 12的原生質體融合獲得Fusant 13，或 Z. mobilis與Fusant 12的原生質體融合獲得Fusant 14，或 Schi. pombe與L. edodes原生質體融合獲得Fusant 15。在碳水化合物的利用性方面，各融合株均會利用glucose、fructose、cellobiose、maltose、potato starch、xylan、cellulose等碳水化合物，並且會發酵potato starch 及cellulose。在碳氫化合物的利用性及發酵性方面，融合株利用碳氫化合物的能力比親株更廣泛，但不具有如酵母的發酵性。在最適生長條件方面：前培養時間10~15小時，在30~37?C， pH4~6，0.5~1% yeast extract並含有CaCl2.2H2O、CoCl2.6H2O等微量元素之2%~4%的馬鈴薯澱粉培養基中的生長情形最好。在Fusant 5對碳水化合物之生物轉換方面： 將Fusant 5培養於potato starch之培養基中，可獲得1.7 % 酒精及0.28 % glycerol，0.86% arabitol；以cellulose為碳源時，可產生2% 酒精及0.95% acetate；以xylan為碳源時，可產生1.6 %酒精及1.1 % xylose；以glucose為碳源時，可產生0.25 % glycerol，6.3 % ethanol。親株Sc