活细胞工作站使用开机顺序1分为上下两列开关先下列按照一.DOCVIP

活细胞工作站使用指南 开机顺序： 分为上下两列开关：先下列按照一、三、二、四、五的顺序打开，上列依顺序由下向上打开； 打开激光器开关； 打开电脑； 打开气瓶，顺时针缓慢拧开，压力阀上调一小刻度即可； 小室加水，要用超纯水（如小瓶没水，请到各自实验室填充）； 选择合适的适配器（33mm培养皿或玻片）后，将细胞放入小室，盖好小室上层小盖。 打开软件。桌面——双击Volocity ——出现 界面 新建文件夹（为了保证每次数据的安全性及有序性，要求每次试验都建立新的文件夹） 方法：点击 Creat a new library图标——选择新建文件夹路径（C:\Ultraview \ioz\当时月份的文件夹）——输入文件名（名称格式为 本人姓名+年月日）——点击 Creat——进入软件界面 打开已有的文件夹进行数据处理 点击 Open a existing library图标——选择新建文件夹路径（C:\Ultraview \ioz\当时月份的文件夹\目标文件名）——点击 Open——进入软件界面 软件界面及显微镜界面构成： 341256图1：软件界面示意图（ 3 4 1 2 5 6 显微镜界面： 图2：显微镜正面示意图（学生可操作的部分有两部分）： 2 2 1 1：目镜下对焦时将“EYE”按亮；将选定的图像转至电脑屏幕时将“L100”按亮 2：PFS定焦按钮 12 1 2 3 1：调焦旋钮 2：明场光强调节旋钮，关机前将其拧至最弱 3：显微镜粗调及微调选择按钮 图4：PFS装置 UltraVIEW VoX图像采集简要操作流程 将样品放入小室，盖好小室上层小盖； 打开软件，单击图1 第三部分中的“video preview”图标，点击图1 第六部分中的⑦打开明场光路； 选择合适的物镜后在显微镜下调整样品对焦； 点击图2.第一部分中的“L100”将显微镜光路切换至共聚焦成像模式； 选择合适的激光通路 依次调节各路激光的激光功率，敏感度（sensitivity）及曝光时间（exposure time）；激光功率最大一般控制在40%左右，如果荧光较弱，敏感度可以拉的很大，但曝光时间一般最大控制在500ms左右。各通道调解后请务必点击右上角的保存按钮。 长时间扫描请启动定焦系统： 单点采集方法：点击按亮图2中的第二部分，打开需要定焦的激光或明场通路，旋转图4所示的PFS装置将焦面调至理想状态，定焦后PFS旋钮不宜再动。 多点采集方法：先选择第一个点，进行至上述步骤1）-6）后， ①点击图1第一部分中的video——选择XY stage；②点击stage——clear all points——add point; ③选择第二个点——add point，不断重复此步骤直至最后一个点；④多点需确定每个点的焦面：点击按亮图2中的第二部分，打开需要定焦的激光或明场通路，点击stage——reviewe points, 旋转PFS装置将焦面调至理想状态，点击对话框中的next按钮，重复上述步骤，直至最后一个点后按STOP结束；⑤保存多点位置：stage——save points（如果扫描中途软件死机，重启后如果软件没有记住你需要的各点，则可以导出保存各点的位置，stage——restore points——点击保存的名字）。 设定采集程序（主要在图1第五部分进行，如下图5所示） 图5：设定采集程序 双击 ，就会弹出程序设定窗口如图6所示）。 图5：设定采集程序 图6：程序设定窗口 图6：程序设定窗口 点击Channels/Z选项： 左侧为使用通路选项，可通过“+”或“-”实现通路的增减。 右侧为Z轴层切设定区域，如果不进行层切，则 选择“none”，如果进行层切则选择“Ultraview”选项，同时进行后续选择，如“capture with this Z-spacing” 为设定层切步进；“capture this many slices”为设定总的扫描层数。这两项只能2选1。 点击Time 选项： 上半部分设定扫描频率： 上半部分设定扫描频率：采用固 定的扫描频率选择选项2，填入所需的时间即可，注意后面单位的选择，如果是分钟选“Timepoint per minute”，依次类推。采用可变的扫描频率选择选项3，通过“+”，填入变化的扫描频率。 下半部分设定扫描时长：选择“until stop is clicked”, 表示采用手动停止的方式。选择第二选项，则填入希望扫描持续的时间即可，同样注意后面单位的选择。 点击points 选项：如果是单点扫描，则“changing XY using ”选“none”，如果是多点扫描，则