实验1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制.pptVIP

实验1-2 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制 1 实验目的 通过本次实验，使学生掌握配制培养基的步骤，能熟练准确配制培养基，并能根据实验目的设计适合的培养基配方。 2 实验原理 将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 3 主要实验用具和仪器 冰箱、普通天平、三角瓶、果酱瓶、移液管、量筒、烧杯、容量瓶、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸（pH5.4~7.0）、药勺、称量纸、标签纸、封口膜、橡皮筋、棉线、电炉、高压蒸汽灭菌锅、电磁炉等。 4 药品和试剂 MS培养基母液、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH 5 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配方设计及配制体积 培养基配方设计：（1）根据培养的目的选择一种培养基为基本培养基。（2）确定培养基中各种激素的浓度及相对比例 配方： MS基本培养基＋0.7％琼脂＋3％蔗糖 配制体积：每小组配制0.5L 6 马铃薯试管苗快速繁殖培养基的配制流程 6.1 药品及用具的准备 6.1.1 MS培养基母液的准备 配制培养基时先将事先配制贮存的母液按顺序放好，并检查这些母液是否已变色或产生沉淀或产生结晶，已失效的就不要取用。 MS培养基母液包括大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机物母液。 6.1.2 用具用品的准备 将洁净的各种用具如三角瓶、果酱瓶、量筒、烧杯、吸管、玻璃棒、医用口杯、精密pH试纸、封口膜、橡皮筋、电炉等准备好放在指定的位置。再将蒸馏水、琼脂、蔗糖、生长调节物质、1mol·L-1NaOH、1mol·L-1HCl准备好。 6.2 培养基的配制步骤 （１）根据需要配制的培养基的量称好所需的琼脂（0.７～0.８％），撕碎后放入医用口杯中，加入适量的蒸馏水（估计加入母液后不超过配制总量）置于电磁炉上加热溶解，边加热边用玻棒搅动。 （２）待琼脂完全溶解后，加入规定用量的母液（可事先取好放于一烧杯中），再加入规定用量的蔗糖，继续加温并不断搅拌，待琼脂煮透后端离火源，根据培养基配方及培养基体积加入所需要的生长调节物质，最后加蒸馏水至所需体积。 （３）调节培养基的酸碱性至pH5.8 由于培养基的pH值直接影响到培养物对离子的吸收，因而过酸或过碱都对植物材料的生长有很大影响。此外，琼脂培养基的pH值还影响到凝固情况。所以，当培养基配制好后应立即进行pH值的调整。最好用酸度计测试，既快又准，如无条件也可用精密pH试纸。培养基若偏酸时用lmol·L-1 NaOH来调节，偏碱则可用lmol·L-1 HCl来调节。一般来说，当pH值高于6.0时，培养基将会变硬；pH值低于5.0时，琼脂不能很好地凝固。 （４）培养基的分装 配制好的培养基要趁热分装，分装时容器口小者可采用漏斗分注，口大者直接加注。试管、三角瓶等培养容器加注量占其容积的1/4～1/3为宜，果酱瓶每瓶20～30ml，太多既浪费培养基，又减少了培养材料的生长空间；太少又会因营养不良影响生长。培养基分装完后，用封口膜封严瓶口，并用橡皮筋扎紧。 （５）培养基的灭菌 培养基分装后应立即置于高压蒸气灭菌锅内进行灭菌。消毒灭菌时，压力表读数约为1.06kgf·cm-2或0.105 MPa （可在0.105 ～ 0.12MPa间，但不得超过0.14 MPa），温度121℃时保持15～30 min左右即可。 （５）培养基的灭菌 为了保证灭菌彻底，在蒸气灭菌锅增压前应先将灭菌锅内的冷空气放尽。排净冷空气的办法有两种： （1）可以事前打开灭菌锅放气阀，煮沸，待大量热蒸气排出后再关闭； （2）也可采用先关闭放气阀，待压力升到约0.04 MPa，温度超过108℃时打开放气阀排出空气，待压力表指针回到0时再关闭放气阀。 培养基灭菌注意的问题： （1）灭菌前检查锅内是否有足够的水； （2）装锅不可过满； （3）培养基消毒灭菌时间不宜过长，也不可超过灭菌锅规定的压力范围；否则，培养基中的蔗糖、有机物质，特别是维生素类物质就会分解，导致培养基变质、变色，甚至难以凝固。 培养基灭菌注意的问题： （4）当灭菌完成后，应切断电源或热源，待灭菌锅内气压接近“0”时，方可打开放气阀，拧开灭菌锅盖取出培养基。切勿为急于取出培养基而打开放气阀放气，否则锅内气压下降太快会引起减压沸腾，导致灭菌锅内各容器中的培养基溢出，造成浪费或污染，甚至烫伤工作人员。 6 接种工具准备 分别取枪状镊子2把、眼科手术剪和手术刀各1把，用牛皮纸和橡皮圈包扎成一套；每套培养皿内放入合适滤纸2～3张，用牛皮纸和橡皮圈包扎成一套；然后和培养基一起统一灭菌。 作业 详细写出马铃薯试管苗快速繁殖培养基配制的流程及在培养基配制的各环节应注意的事项。 * *