柔嫩艾美耳球虫菱形蛋白样蛋白酶(EtROMs)基因的克隆不与不同发育阶段转录水平分析.pdfVIP

刖 吾 —I上 士-／c fill 吾 鸡球虫病是一种全球流行的、严重危害集约化养鸡业生产的寄生性原虫病【11， 被美国农业部列为对禽类危害最严重的五大疾病之一，在无预防措施或预防失败(如 因抗药性问题致药物无效)的情况下，鸡发病率可达30Vo-100％，致死率可高达80％t21。 全球每年因此而导致的经济损失高达35亿美元。我国因球虫病所致养鸡业的经济损 失估计可高达50亿元人民币。长久以来，国内外鸡球虫病的治疗一直采用“饲料中 添加化学药物为主，结合传统疫苗免疫为辅的双重防控体系”的方法【3】，但这一现 状正受到鸡球虫广泛而严重的抗药性的挑战，因此生产中迫切需要新型抗球虫药面 市。然而迄今为止，新型抗球虫药物的研制受到较多原因限制。其中，最为关键的 是寻找新型的药物靶标141。目前，国内外已有部分实验室开始进行新型抗球虫药物 的研究，但尚无理想的先导物或候选药物的报道。因此，新型药物靶标分子的挖掘 将有助于抗球虫药物的开发。 上世纪80年代，研究人员发现顶复门原虫入侵宿主细胞过程中顶端复合器分泌 一些因子协助虫体进入细胞，在接下来的研究中也发现和鉴定出许多入侵相关的因 随着研究的深入，发现菱形蛋白样蛋白酶(ROMs)也参与了虫体的入侵过程，是 该过程中一类重要蛋白酶。其主要功能是在虫体尾端的胞膜中水解粘附素分子，帮 助虫体与宿主细胞分离便于纳虫空泡形成。当虫体入侵宿主细胞过时位于虫体顶端 的微线通过类锥体分泌大量微线蛋白(MICs)、项膜抗原(AdVtA)等具有粘附作用的 分子能够粘附宿主细胞表面受体，与棒状体分泌颈部蛋白(RONs)等其它入侵因子 Junction,MJ’，)，接着虫体旋转 形成复合物插入宿主细胞膜形成运动结合体(‘WIoving 进入细胞。随着虫体的不断进入，粘附素分子也随之向虫体尾端转移，当虫体完全 进入后存在于虫体尾端的菱形蛋白样蛋白酶便会发挥其水解作用，酶解切除表面的 粘附素分子掣7鼬】，使得虫体与宿主胞膜解离接着由棒状体分泌的蛋白ROPs和致密 颗粒所分泌的致密颗粒蛋白(GRAs)共同形成纳虫空泡膜完成入侵。目前，除艾美 耳球虫外的其它顶复门原虫都已鉴定出多种ROMs，且不同种原虫ROMs功能也不 ’本研究受国家自然科学基金．NSFC．广东联合基金重点项目“鸡球虫的宿主细胞入侵与免疫激发机理研究” 资助。 V 柔嫩艾美耳球虫菱形蛋白样蛋白酶(EtROMs)基因的克隆及转录水平研究 相同，表明ROMs不仅参与了宿主细胞入侵过程[Io,II】，还参与其它生理过程。例如， rhomboid．1丑(e 刚地弓形虫ROM6属于PARL家族(Presenilin-associated protein)， 参与线粒体膜的融合过程【I21，还有溶组织阿米巴原虫ROMl的水解底物并不是粘 附素分子而是与免疫逃避有关的物质——抑制素，可以帮助虫体逃避宿主细胞的免 疫应答等。 目前，国内外对艾美耳球虫的菱形蛋白样蛋白酶的研究较少，除了吉林大学的 研究以刚地弓形虫、疟原虫等其它原虫的ROMs基因为参照，对艾美耳球虫基因组 数据库进行分析。分析结果表明柔嫩艾美耳球虫中存在TgROMs同源物EtROMI 和EtROM4。根据生物信息学分析拼接获得的E．tenella ROMl、ROM4的编码序列 的开放阅读框(ORF)序列，利用SMART 序列；为了进一步研究ROMs功能，利用Real-timePCR的方法检测E．tenella生活 虫不同阶段的转录水平情况的进行分析为其功能研究打下基础。总之，以上工作填 补了鸡艾美耳球虫菱形蛋白样蛋白酶研究空白，明确并证实了球虫中至少存在三种 以上的菱形蛋白样蛋白酶，这些研究结果对于艾美耳球虫入侵时关键入侵因子的鉴 定提供便利并且推动了其入侵过程中相关因子的研究，为球虫乃至项复门原虫的入 侵重要分子的基础研究提供支持。