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海南尖峰岭草药叶下珠没食子酸提取工艺 探究 摘要：本研究将采自海南尖峰岭的叶下珠，通过离 子化萃取分离法提取了其中的没食子酸。我们在预实验中摸 索了没食子酸的提取溶剂和提取方法。采用正交试验的方 法，优化了影响没食子酸提取效率的三要素：浸泡时间，提 取次数和浸提时间。试验结果表明提取没食子酸的最佳工艺 条件是：浸泡1.5小时，抽提3次，浸提时间为2小时，在 此条件下没食子酸的提取率最高达0. 351%o 关键词：提取叶下珠没食子酸 中图分类号：G642. 0文献标识码：A DOI : 10. 3969/j. issn. 1672-8181. 2014. 01. 040 叶下珠，别名珍珠草、珠子草等，为大戟科植物叶下珠 (Euphorbiceace urinaria L)的干燥全草。有关叶下珠的 药用价值始载于清朝，可治疗小儿疳眼，疳积等，现在认为 叶下珠甘凉，入肝肺二经，平肝清热，利水解毒［1］。通过 对叶下珠的化学成分和药理作用的研究表明，叶下珠中的没 食子酸具有抗乙肝病毒(HBV)、保肝护肝的作用［1-2］,且 其含量较高，是叶下珠的主要有效成分，这一点引起了国内 外很大的关注。然而，近年来的研究多聚焦在没食子酸药效 上，少关注提取工艺改良，这不利于叶下珠产业的健康发展, 本研究对没食子酸的提取工艺进行了多次探索和优化，为进 一步高效开发利用没食子酸提供了一些理论依据。 1材料与方法 1.1材料及设备 原料及药品：叶下珠药材（采自海南尖峰岭及海口周边, 取之干燥后过60目筛）；95%乙醇为分析纯；磷酸为分析纯; 甲醇为色谱纯，蒸馆水为实验室自制；没食子酸对照品（购 自SIGMA公司）。 仪器：METTLER-TOLEDO电子天平（梅特勒-托利多仪器 （上海）有限公司）；Poly-science数显恒温水浴锅（单孔, 美国）；高效液相色谱仪（日本岛津制作所）；HP-01真空抽 滤机；101-1型干燥箱（中国上海市实验仪器总厂）；Haier 电冰箱（青岛海尔股份发有限公司）；Therom sceentific超 纯水机（美国）；FZ102微型植物试样粉碎机（北京中兴伟业 仪器有限公司）；109号药典检验筛（浙江省上虞县纱筛厂制 造）。 1.2实验方法 1.2. 1工艺流程 工艺流程大致分为以下步骤：叶下珠药材的精选、粉碎 过筛、回流提取、过滤、试品溶液备用。 1.2.2提取溶剂的选择 没食子酸属有机酸及多酚类物质，在热水、甲醇、乙醇 或乙瞇中溶解［3］。经过多种溶剂提取叶下珠的没食子酸的 预实验后，本实验选择环保材料水作为提取溶剂。 1.2.3提取方法的选择 在提取方法的预实验中，我们探索了冷浸法、热回流提 取法、超声处理法［3］提取叶下珠的没食子酸，综合考虑各 方面因素后，本实验选择冷浸法和热回流提取法。 1.2.4对照品溶液的制备 取适量没食子酸对照品，用万分之一天平称量，然后加 50%甲醇制成25 /mL没食子酸对照品溶液。 1.2.5供试品溶液的制备 取供试品（过60目筛）约4幻 精密称量，置于250mL 三角瓶中，加水60mL,连接回流冷凝管，加热至沸腾后保持 沸腾1小时。冷却后，取下三角瓶，对供试品进行初步过滤, 取滤液lmL置于10mL容量瓶中，用50%甲醇定容至10mL刻 度,用孔径为0.45的微孔滤膜过滤。 1. 2. 6没食子酸含量的测定 本实验采用高效液相色谱法测定叶下珠中没食子酸的 含量［4］,填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；流动相为甲醇 -0.2%磷酸溶液（体积比5： 95）；流速为0. 9ml/min；检测 波长为272nm；进样为10 L；柱温为室温［5］,理论板数按 没食子酸计算应不低于2000o按照没食子酸吸收峰的峰面积 计算供试品中没食子酸的含量。 2结果与分析 2. 1实验结果 实验发现，浸泡时间，提取次数，提取时间对没食子酸 的得率有较为显著的影响，我们最终对这3个因素作在3个 水平(见表1)上进行L9 (34)正交试验，测定不同工艺条 件下提取液中没食子酸的含量，结果表2,表3,图1,图2： 表1正交实验因素水平 表2正交试验的安排及结果 表3方差分析 图1没食子酸标准品图 图2没食子酸样品图 2. 2结果分析 通过对表2、表3的结果分析，各因素对提取效果的影 响程度分另为ABC,其中影响最大的是提取次数，而提取 2h后就没有什么变化了。从各因素的参数估计看来，为保证 没食子酸完全被提取出来，选择最佳因素水平组合为 A3B2Clo 3讨论 据流行病学调查报告，我国至少有8亿人感染过乙型肝 炎，而我国人群中的乙肝表面抗原的携带率高达10%左右， 即在我国约有1.3亿人为乙肝病毒携带者，他们中的四分之 一最终将发展成慢性肝炎、肝硬化或原发性肝癌。所以，在 我国研究开发防治乙型肝炎的药物迫在