分子生物学DNA的复制、损伤与修复.pptx

Replication and damage repair ;第一节 DNA的复制(Replication, DNA biosynthesis); （一）半保留复制 DNA在复制时，以亲代DNA的每一股作模板，合成完全相同的两个双链子代DNA，每个子代DNA中都含有一股亲代DNA链，这种现象称为DNA的半保留复制(semi-conservative replication)。;DNA以半保留方式进行复制，是在1958年由M. Meselson 和 F. Stahl 所完成的实验所证明。该实验首先将大肠杆菌在含15N的培养基中培养约十五代，使其DNA中的碱基氮均转变为15N。将大肠杆菌移至只含14N的培养基中同步培养一代、二代、三代。分别提取DNA，作CsCl密度梯度离心. ;（以原核生物 大肠杆菌为例） 原料： dNTP，Mg++ 双链DNA模板 引物（primer），常是RNA，有游离的 3’OH。 引物酶（primase，DnaG），用于合成复制所必需的RNA引物 解螺旋酶 ( helicase ) , DnaB, 由DnaA和DnaC协助在复制的起始点（Ori C）上解开双螺旋。;复制的起始点与方向;E.coli复制起始点oriC跨度为245bp，包括两个关键序列：13bp的序列和9bp序列,它是决定和控制E.coli染色体复制的唯一片段。 ; 9bp重复序列，重复出现4次，能与起始蛋白dnaA特异结合，当dnaA蛋白（约20种）结合于ori的4个部位上时复制开始。  dnaA蛋白（一种专一的蛋白）和ori结合后，双螺旋解开形成复制叉。故dnaA蛋白与启动解链有关,dnaA蛋白是起始的关键成分。;大肠杆菌复制起点成串排列的重复序列;复制方向;复制中的大肠杆菌染色体放射自显影图(Caims实验);;多个起始点;二、 DNA复制的酶学;一、复制的化学反应;二、 解链相关酶类; DNA解旋酶(helicase)（解链酶） 功能：DNA的双螺旋解链（解DNA双链），解开一对碱基，需2分子ATP， 作用点：DNA上局部单链处，向双链方向解链。 种类：E.coli有四种解螺旋酶，I、II、III和rep蛋白。 I、II、III中任一种沿模板5-3 方向移动，rep蛋白沿模板3 -5方向移动。;2. 拓扑异构酶（Topo）; 首先在大肠杆菌中被发现，它可使DNA的一条链发生断裂和再连接，反应无需供给能量。 另外，DNA复制时负超螺旋的消除，亦由拓扑异构酶Ⅰ来完成，但它对正超螺旋无作用。; 由两个A亚基和两个B亚基组成，即A2B2。它能使DNA的两条链同时发生断裂和再连接，当它引入负超螺旋以消除复制叉前进带来的扭曲张力时，需要由ATP提供能量。 两种拓扑异构酶在DNA复制、转录和重组中均发挥重要作用。;拓扑异构酶 I 抑制剂：喜树碱类 拓扑异构酶 II 抑制剂：依托泊苷，多柔比星，阿霉素类等;3. 单链DNA结合蛋白（SSB）;三、DNA聚合酶（DNA-pol） 即依赖于DNA的DNA聚合酶（DDDP） ;DNA聚合酶功能;大肠杆菌三种DNA聚合酶比较;四、引物酶(Primase)和引发体;DnaA; ;第三节 DNA生物合成过程;一 复制的起始;(二)引发体的生成;（三） RNA引物的合成;参与复制起始的蛋白因子;领头链的合成;复制过程简图;;二、真核生物DNA生物合成;; 1.端粒telemer：指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构。 2.结构特点： （1）由末端单链DNA序列和蛋白质构成。 （2）末端DNA序列是多次重复的富含G、C碱基的短序列。; 3.功能： （1）维持染色体的稳定性 （2）维持DNA复制的完整性 4.端粒酶：由RNA和蛋白质组成 （1）RNA发挥模板作用 （2）蛋白质发挥逆转录酶活性;端粒酶的催化延长作用;DNA聚合酶复制子链; 引物合成后，由DNA polⅢ（在真核细胞为DNA聚合酶?和?)催化，按碱基配对原则，将dNTP逐一添加到引物3’ 末端，形成磷酸二酯键，使新合成的链不断延长 ;;（三）终止阶段;半不连续复制(semi-discontinuous replication);　　　基因组能独立进行复制的功能单位称为复制子 (replicon)，每个复制子都含有控制复制起始的起点 (origin)，可能还有终止复制的终点(terminus)。每个起 始点产生两个移动方向相反的复制叉，复制完成时，复 制叉相遇并汇合连接。习惯上把两个相邻起始点之间的 距离定为一个复制子。; DNA复制时，以复制起始点为中心，向两