课件：固定化酶.pptVIP

辅酶固定化的方法： 固定化方法与酶相似，一般采用溴化氰法，碳二亚胺法以及重氮偶联法等共价偶联，或将其进行适当的化学修饰后固定在超滤器中。 辅酶固定化必须解决辅酶在多个酶之间传递的障碍。 辅酶的固定化 辅酶的固定化 辅酶固定化的形式： 五、固定化酶的应用 乙酰 -DL — Ala L — Ala +乙酸 乙酰 -D — Ala Aminoacylase 氨 基 酰 化 酶 1、固定化酶在工业生产上的应用 泵 储 罐 反应产物 离心机 消旋反应器 固定化酶柱子 晶体 L-Ala L-Ala A-D-Ala A-L-Ala A-D-Ala 2、固定化酶在医学上的应用（酶电极） （1）葡萄糖电极 半透膜 酶胶层 感应电极 酶电极示意图 ?－D－葡萄糖＋O2 D－葡萄糖酸－1，5－内酯＋H2O 葡萄糖＋醌＋H2O 葡萄糖酸＋氢醌 葡萄糖氧化酶 氢醌 醌＋2H＋＋2e－ Pt 铂电极 （2）脲电极 Urea + 2H2O 2NH4++2HCO3- 脲酶 产生的2NH4+为阳离子电极感应。 此外还有： 氨基酸电极 醇电极 尿酸电极 乳酸电极 青霉素电极 亚硝酸离子电极：菠菜亚硝酸还原酶产生NH3 酶电极 特点：快速、方便、灵敏、精确 范围：糖类、抗生素、氨基酸、甾体化合物、有机酸、脂粉、醇类、胺类以及尿素、尿酸、硝酸、磷酸等 要求：酶必须有较强的专一性，并且要有一定的纯度。 3、固定化酶在基础研究中的应用 Creatine Kinase 肌酸激酶（MW 82000， Dimer） ＋ ＋ 衍生物 C 衍生物 B GdnHCl 去除 GdnHCl 衍生物 A 表7－3 固定化肌酸激酶及固定化亚基的蛋白质含量及比活力 酶的衍生物 蛋白质含量 比活力 （?g/ml 凝胶）（％） （单位/mg) 衍生物A 400 100 28.0 衍生物B 210 52.5 25.7 衍生物C 380 95.0 27.4 4、 固定化酶在药物上的应用 例1 固定化青霉素酰化酶，只要改变pH值等条件，就可以生成不同的产物。 青霉素酰化酶催化合成头孢类抗生素 7-ACA as nucleus 青霉素酰化酶催化合成头孢类抗生素 7-ACCA or 7-ADCA as nucleus 酶促合成头孢类抗生素 -- Reversible reaction -- Hydrolysis of substrate or product by biocatalyst -- Difficulty of separation of product from reactants + + Esterase Hydrolase Synthetase 例2：制造人工肾 利用固定化脲酶透析液和活性炭一起制成的体外循环装置，大大提高了疗效。 Thank You！ 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * * * * 载体活化的方法 A．重氮法 B．叠氮法 C．烷基化反应法 D．硅烷化法 E．溴化氰法 A．重氮法 反应示意式如下 A．重氮法 目前在我们国内用的较多的载体是对氨基苯磺酰乙基（ABSE）纤维素、琼脂糖，葡聚糖凝胶和琼脂等 该方法需要载体具有芳香族氨基 A．重氮法 反应式及原理 B 叠氮法 例 用羧甲基纤维素叠氮衍生物制备固定化胰蛋白酶，步骤如下： ⑴ 酯化 ⑵ 肼解 ⑶ 叠氮化 (4) 偶联 B 叠氮法 对含有羧机基的载体，与肼基作用生成含有酰肼基团的载体，再与亚硝酸活化，生成叠氮化合物。最后于酶偶联 C．烷基化反应法 含羟基的载体可用三氯三嗪等多卤代物进行活化，形成含有卤素基团的活化载体。 D．硅烷化法 一般常用的载体：多孔玻璃，多孔陶瓷。 多孔玻璃特点： ①机械强度好，表面积大。 ②耐有机溶剂和微生物破坏。载体可以再生，寿命长等。 D．硅烷化法 D．硅烷化法 D．硅烷化法 E ．溴化氰法 本方法主要用溴化氰（CNBr）活化多糖类物质。如纤维素、葡聚糖、琼脂糖等，其中以琼脂糖为载体的占多数（大孔网状结构）。用溴化氰法活化琼脂糖制备得到的固定化酶目前使用很广，特别用作亲和层析，有着良好的性能。 E ．溴化氰法 双功能试剂： 常用的是戊二醛