课件：血浆蛋白质醋纤膜电泳.ppt

注意事项 7、选择合适的缓冲液离子强度。 8、两电泳槽内缓冲液面应在同一水平面。 9、要控制好电压、电流和电泳时间。 10、电泳槽内两极溶液要交替使用，操作时应尽量减少缓冲液的污染、水分蒸发、pH及离子强度的改变，防止霉菌的滋长。 作业 1、简述血红蛋白电泳诊断地中海贫血的原理及检验指标. 2、简述肾病综合征、慢性肝炎及肝硬化患者的血浆蛋白电泳结果可能出现怎样的改变. 后面内容直接删除就行 资料可以编辑修改使用 资料可以编辑修改使用 主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等 公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！ 致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、PPT设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求 * 电泳分类：自由电泳、区带电泳（按支持物不同分，按装置不同分，按pH的连续性不同分） * 薄膜对各种蛋白质（包括血浆白蛋白、溶酶菌及核糖核酸酶）几乎完全不吸附，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象。对染料也没有吸附，因此不结合的染料能完全洗掉，无样品处几乎完全无色。电渗作用虽高但很均一，不影响样品分离效果。又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少。5ug的蛋白质可得到满意的分离效果。 * * * * 血浆蛋白质 醋酸纤维素薄膜电泳 （Electrophoresis on cellulose acetate membrane of serum proteins) 实验2 实验目的 1、掌握醋酸纤维素薄膜电泳的原理 2、掌握醋酸纤维素薄膜电泳分离血浆蛋白质 的实验操作技术和注意事项。 3、了解醋酸纤维素薄膜作支持物进行电泳 的优点及使用范围。 醋酸纤维素薄膜电泳 采用醋酸纤维素薄膜作为支持物的电泳方法叫做醋酸纤维素薄膜电泳。 醋酸纤维素是纤维素的羟基乙酰化所形成的纤维素醋酸酯，将它溶于有机溶剂（如丙酮 、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等）后，涂抹成均匀的薄膜，干燥后就成为醋酸纤维素薄膜。该膜具有均一的泡沫状结构，厚度约为120μm，通透性好，对分子移动阻力少，是一种良好的电泳支持物。 醋酸纤维素薄膜电泳的优点及应用 具有微量、快速、简便、区带清晰、灵敏度高、便于摄影和保存等优点。 用于科学实验、生化产品分析和临床化验，如血浆蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖蛋白、甲胎蛋白、同工酶等的分离鉴定。 原 理 血浆中各种蛋白质的等电点不同，一般都低于pH7.4。它们在pH8.6的缓冲液中均解离带负电荷，在电场中向正极移动。由于血浆中各种蛋白质分子大小、形状及所带的电荷量不同，因而在醋酸纤维素薄膜上电泳的速度也不同。因此可以将它们分离为清蛋白（Albumin)、α1-球蛋白、α2-球蛋白、β-球蛋白、γ-球蛋白，纤维蛋白原６条区带。 血浆蛋白质的等电点、平均相对分子量、及正常含量 球 蛋 白 清蛋白 A α1 α2 β γ pI 相对分子量 （×104） 含量（%） 4.88 6.9 57~72 5.06 20 2~5 5.06 30 4~9 5.12 9~15 6.2~12 6.85~7.3 15.6~30 12~20 实验材料 健康人血浆或动物血浆 试剂 1、pH8.6巴比妥缓冲液 2、氨基黑10B染色液 3、漂洗液 4、洗脱液 5、透明液 （试剂配制参见实验讲义） 定量时用 仪器和器材 1、常压电泳仪、电泳槽 2、醋酸纤维素薄膜（2×8cm） 3、点样器（载玻片或盖玻片）、玻璃板 4、培养皿（泡膜、染色和漂洗用） 5、滤纸 6、镊子 7、试管、试管架、吸量管 8、分光光度计 （定量用） 操作步骤 1、薄膜准备 ①将醋酸纤维素薄膜切成2×8cm的小条。 ②在薄膜粗面一端1.5cm处用铅笔轻轻画一横线。 ③在薄膜角上用铅笔作一标记。 ④将醋酸纤维素薄膜浸泡于缓冲液中20min。 操作步骤 醋酸纤维素薄膜规格及点样位置 8cm 2cm 点样线 点样区 1.5cm (粗面） 操作步骤 2、电泳仪准备 在电泳槽内加入缓冲液，使两个电极槽内的液面等高。先剪裁尺寸合适的滤纸条，取双层滤纸条附着在电泳槽的支架上，使它的一端与支架的前沿对齐，而另一端浸入电极槽的缓冲液内。用缓冲液将滤纸全部润湿并驱除气泡，使滤纸紧贴在支架上，即为滤纸