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微生物自动化检测 张德纯 教授 病原生物学教研室 传统的微生物鉴定方法是：涂片革兰染色镜检，常规生化试验，血清学鉴定等。70年代后随着分子生物学的进展，用于检测M的仪器设备在不断改进，加之临床对检验人员的要求越来越高，故现代M检验和鉴定技术逐步趋向于简单快速化、微量化、商品化（标准化）、系列化和自动化。 本章主要介绍 一、自动化血培养检测和分析系统 二、微生物数码分类鉴定系统 三、微生物自动鉴定和药敏系统 四、全自动抗原抗体检测系统 一 、 自动血培养检测和分析系统 正常人的血液是无菌的，当细菌侵入血流时，可引起菌血症或败血症。此时血培养检查的快速和准确性对诊断和治疗具有极其重要的意义。 （一）工作原理 在细菌生长繁殖和代谢的过程中必然会产生最终代谢产物二氧化碳（CO2）。可通过各种方法检测细菌生长时所产生的CO2：如放射性14C标记技术、特殊的CO2感受器或均质荧光等检测培养基中酸碱度（pH）、氧化还原电势(Eh)等的变化，以判断血液和其他无菌体液中有无细菌存在。 （二）仪器的基本结构和性能 半自动血培养仪仅有检测（CO2）系统，而全自动除检测系统外，还有恒温孵育系统、电脑分析系统和打印系统等。 （三）配套试剂和操作要点 1.培养瓶：有需氧培养瓶、厌氧培养瓶、儿科专用瓶、结核菌培养瓶、高渗培养瓶、中和抗生素培养瓶等种类。根据分离细菌的需要灵活选用培养基中的营养成分和抗菌药物拮抗剂。 2.真空采血系统：配有一次性使用的无菌塑料管，两端与两个无菌针头相连，操作时将一端的针头进行静脉穿刺，另一针头插入负压的培养瓶内，所采得的血液因负压作用直接进入培养瓶。 3.取血量：采血量一般以肉汤培养基的1/10为宜，成人一次采血量为5~6ml，婴幼儿为1~2ml。常用的培养基容量为50ml/瓶，取血5~6ml，注入培养瓶中。 4.采血方法：一般情况下，应在病人发热初期或发热高峰时采血。原则上应在抗菌药物应用之前，对已用而不能中止的病人，也应在下次用药之前采集，采血部位一般从肘静脉采集，采血部位局部皮肤应彻底消毒。 （四）常用的血培养仪 1.半自动培养仪 以BACTEC460为代表。将待测标本接种在含14C-底物的专用培养瓶中，该系统只有检测系统，且检测时间较长，放射性废物的处理较为困难。 2.全自动血培养仪 以BACTEC9000系列、BacT/Alert系统、 VITAL。 特点：培养基多种多样；可恒温震荡培养；无放射性污染；能够连续自动监测；可与细菌鉴定仪结合使用。 二 、微生物数码分类鉴定系统 微生物数码分类鉴定技术集数学、电子、信息及自动分析技术于一体，采用标准化、成品化和配套的生化反应试剂条（板），可将细菌鉴定到属、群、种和亚种或生物型，并可对不同来源的临床标本进行针对性的鉴定。 （一）工作原理 基本原理是计算并比较数据库内每个细菌条目对系统中每个生化反应出现的频率总和。 1、数据库 由许多许多细菌条目组成。每个条目代表一个细菌或一个细菌生物型。 2、 编码 将所得到细菌生化反应模式转化成数学模式，可把被测细菌的全部生化反应结果快速转录成数字（编码），经查阅编码检索本或电脑分析系统又可将数字转化成相应的细菌名称。 3、查码 在编码检索本内寻找数码谱。 4、解释 （二）数码分类鉴定系统的组成和操作 1. 数码分类鉴定系统的组成 由试剂条（板）、添加试剂及检索工具配套形成的完整的微生物鉴定体系。 （1）试剂条：选择识别力强的生化反应优化组合成专一的鉴定试剂条。常用的生化反应有发酵试验、同化试验、同化或发酵抑制试验、酶试验以及其他传统的生化反应。 （2）添加试剂：有些试验经孵育后需添 加试剂才能呈现颜色变化。 （3）检索工具：检索工具包括鉴定表、 编码本和电脑软件，可供人工查阅鉴定 结果或由电脑自动处理并报告。 2.操作要点 （1）准备 1）标本经分离培养得到的纯菌落。 2）借助涂片、染色镜检、氧化酶等试验对被测菌进行初步鉴定，以选择合适的试剂条。 3）挑选被测菌的纯菌落接种试剂条。 （2）接种 首先制备细菌悬液，然后调整浓度至1.5亿/ml或1.5亿/ml，最后进行接种。 （3）观察及记录结果 接种后的API试条一般经35℃~37℃孵育18~24h可观察结果。 （4）结果的解释 解释的依据是鉴定百分率表、编码本和电