哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK真核表达载体构建及在-华中农业大学学报.PDF

第 卷 第 期 华 中 农 业 大 学 学 报 30 5 Vol.30 No.5 年 月 , 2011 10 JournalofHuazhon A riculturalUniversit Oct.2011646~651 g g y 哈维氏弧菌外膜蛋白OmpK 真核表达载体 构建及在毕赤酵母中的表达 1 1 2 2 1 何超军 邱杨玉 毛芝娟 陈吉刚 吴志新 , ; , 1.华中农业大学水产学院 武汉 430070 2.浙江万里学院生物与环境学院 宁波 315100 , , 摘要 采用已构建的原核重组质粒 为模板 通过 扩增 成熟肽基因片段 引入 pET30aOm K PCR Om K - p p , , , 酶切位点后克隆至分泌表达载体 经 线性化后 氯化锂法转化至毕赤酵母 中 并经 遗 pPIC9K SalⅠ GS115 G418 , , , 传霉素筛选高拷贝酵母转化子 最后进行甲醇诱导表达 表达上清经SDS电泳检测及Westernblot鉴定 - 表明重组蛋白已经表达。 ( ); ; ; ; 关键词 哈维氏弧菌 外膜蛋白 表达载体 毕赤酵母 表达 Vibrioharvei Om K y p 中图分类号 文献标识码 文章编号 ( ) Q782 A 1000-2421201105-0646-06 哈维氏弧菌( )是一种革兰氏阴 Vibrioharvei y 1 材料与方法 [] 1 、 , 性 发光的海洋细菌 为水产养殖鱼虾类的重要致 [ ] 2-5 、