重组人胰岛素 信息资料.docxVIP

CN1177928A?[中文]权利要求书 CN1177928A [中文] 发明名称 -- 生产人胰岛素 申请号 C申请日 1994.12.29 公开（公告）号 CN1177928A 公开（公告）日 1998.04.01 IPC分类号 A61K38/28; C12N15/17 申请（专利权）人 生物技术通用公司; 发明人 J·R·哈特曼;S·门德罗维茨;M·戈雷基; 优先权号 优先权日 申请人地址 美国新泽西州; 摘要?[支持框选翻译]简体中文-英文??英文-简体中文?其他语种 提供了改进且有效的通过折叠胰岛素原杂交多肽来生产重组人胰岛素的方法。 摘要附图 发明名称 -- Generation of human insulin 申请号 C申请日 1994.12.29 公开（公告）号 CN1177928A 公开（公告）日 1998.04.01 IPC分类号 A61K38/28; C12N15/17; C12N15/16 申请（专利权）人 BIO TECHNOLOGY GENERAL CORP; 发明人 HARTMAN J R;MENDELOVITZ S;GORECKI M; 优先权号 C优先权日 1994.12.29 摘要?[支持框选翻译]简体中文-英文??英文-简体中文?其他语种 Abstract： An improved and efficient process for the production of recombinant human insulin by folding of a proinsulin hybrid polypeptide is provided. 摘要附图 1.生产胰岛素的方法包括： (a)在允许形成正确二硫键的条件下，折叠含胰岛素原的杂种 多肽； (b)使折叠的、二硫键键合的杂种多肽经酶促裂解以产生胰岛 素； (c)纯化胰岛素。 2.根据权利要求1的方法，其中步骤(a)还包括在约pH8.5- 12.0，约4-37℃将杂种多肽保温约1-30小时。 3.根据权利要求2的方法，其中在存在抗坏血酸的条件下进行 保温。 4.根据权利要求2的方法，其中pH为11.0-11.25。 5.根据权利要求3的方法，其中pH为11.0-11.25。 6.根据权利要求3的方法，其中在折叠混合物中，抗坏血酸的 浓度为每摩尔SH基约2摩尔抗坏血酸。 7.根据权利要求2的方法，其中所述保温时间为约5小时。 8.根据权利要求3的方法，其中所述保温时间为约5小时。 9.根据权利要求1的方法，其中步骤(b)还包括： (I)将pH调到约8.8-9.0；和 (ii)在16-37℃用胰蛋白酶和羧肽酶B裂解杂种多肽30分 钟-16小时。 10.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)还包括用DEAE- Sepharose层析和RP-HPLC纯化。 11.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)还包括用超滤和CM -Sepharose层析纯化。 12.根据权利要求1的方法，其中步骤(c)还包括用DEAE- Sepharose层析和苯基-Sepharose层析。 13.根据权利要求1的方法，其中用ATCC保藏号为69361的质 粒pDBAST-LAT表达胰岛素原杂种多肽。 14.根据权利要求1的方法，其中用ATCC保藏号为69363的质 粒pλBAST-LAT表达胰岛素原杂种多肽。 15.根据权利要求1的方法，其中用ATCC保藏号为69362的质 粒pBAST-LAT表达胰岛素原杂种多肽。 16.根据权利要求1的方法，其中通过处理含编码杂种多肽之 DNA的细菌细胞，以便DNA指导所述多肽的表达，从而得到步骤(a) 的杂种多肽。 17.根据权利要求16的方法，其中从所述细胞中回收杂种多肽。 18.根据权利要求16的方法，其中所述处理包括存在葡萄糖，甘 油或半乳糖的条件下发酵。 19.根据权利要求17的方法，其中所述回收包括： (I)破坏所述细菌细胞的细胞壁或其片段以产生溶胞产物； (ii)通过离心从溶胞产物中分离细胞内沉淀物；和 (iii)增溶所述沉淀物。 20.含有胰岛素原和与所述胰岛素原的N-末端相连的前导肽的 多肽，其中所述多肽被折叠并含有正确的二硫键。 21.根据权利要求20的多肽，其中所述前导肽衍生于CuZnSOD 的N-末端。 22.根据权利要求21的多肽，其中所述前导肽含有62个氨基酸， 其前为氨基酸Met，其后为Arg残基。 23.根据权利要求20的多肽，其中所述胰岛素原含有通过单Arg 残基与胰岛素A链共价相连的胰岛素B链。 24.根据权利要求20的多肽，其中所述胰岛素原含有通过二肽 Lys-Arg残基与胰岛素A链共价相连的胰岛素B链。 25.根据权利要求20的多肽