课件：酶蛋白的化学修饰.ppt

4）酰基化： O E－SH ＋ ? E-S-C-R + HX （5）修饰咪唑基（两种） 通常通过对咪唑基上氮原子酰基化或烷基化修饰组氨酸咪唑基。 1) 焦碳酸二乙脂（diethyl paracarbonate）是最常用的一个试剂： + +C2H5OH +CO2 2) 碘代乙酸： +ICH2COOH + HI ? （6）吲哚基的化学修饰 来源：Trp 修饰反应：氧化反应 修饰剂： N-溴代琥珀酰亚胺 （7）修饰酪氨酸残基（三种） 1）碘化反应： I2＋ + HI ? 2）硝化： （NO2)4C+ +(NO2)3CH 3）N-乙酰咪唑: N-ethyl imidazole 氨基酸 侧链基团 修饰剂 Lys 氨基 三硝基苯磺酸，2，4－二硝基氟苯、碘乙酸、碘乙酰胺、丹磺酰氯、亚硝酸 Asp、Glu 羧基 水溶性碳化二亚胺 Arg 胍基 苯乙二醛，1,2－环己二酮、丁二酮 Cys 巯基 碘乙酸、碘乙酰胺、N-乙基马来酰亚胺 二硫键 巯基乙醇、DTT His 咪唑基 焦碳酸二乙酯、碘乙酸 Tyr 酚羟基 碘、四硝基甲烷 Trp 吲哚基 N-溴代琥珀酰亚胺 各种氨基酸侧链的修饰剂 3.有机大分子对酶的化学修饰 有机大分子对酶的化学修饰是利用一些活性分子把特定的有机大分子结合到酶上，以改变酶的生理、生化性质，实现特定目的的技术。 该技术可用于改变酶的稳定性、组织分布性、抗原性及其它生化性质，在医药、工业等领域有着广泛的应用前景。 1）聚乙二醇（polyethylene glycol, PEG） 聚乙二醇是一个线性分子，有良好的生物相容性，在体内不残留，无毒，无抗原性，是一种优良修饰剂。 其修饰方法有多种，如三氯均嗪法、叠氮法、琥珀酸酐法、重氮法等。 三氯均嗪法是一个常用的方法。三氯均嗪上氯原子很活泼，易发生亲核取代。三个氯原子反应性依次下降。 2）右旋糖酐 右旋糖酐是由α-葡萄糖经α-1，6糖酐键形成的多糖，有较好的水溶性及生物相容性，可用作代血浆。 右旋糖酐链上的双羟基结构经活化后可与酶上的自由氨基相结合。 溴化氰法是右旋糖酐修饰酶分子的常用方法。邻双羟基在溴化氰作用下活化，然后在碱性条件下可与酶分子上氨基反应，共价结合。 3）肝素 肝素有抗凝血、抗血栓、降血脂活性，适于修饰溶栓酶类以增加疗效。 碳二亚胺法 5）白蛋白 碳二亚胺法 第三节 酶的亲和修饰 亲和标记 (Affinity Labeling） 亲和标记是最有意义的一种化学修饰，这是因为它可以很专一性地作用于酶的活性部位。亲和标记是分步反应，修饰剂先可逆地结合在酶的活性部位，再不可逆地修饰该部位特定基团，一般是必需基团，而造成不可逆失活。亲和标记修饰剂一般是底物类似物，和底物含有共同的结合于酶的基团。 作用于组氨酸侧链的试剂TPCK和TLCK是一个典型例子 TPCK TLCK 亲和标记试剂在酶上具有特定结合部位，其解离常数也易于测定，可以提供酶的结构信息，是理论研究中的一类常用的修饰剂。 亲和标记试剂一般可以在较低浓度下有效修饰酶，改变酶的活性，特别是专一性较强，是药物等的优良候选者，有广泛的应用价值。