酵母双杂交原理和应用.pptx

蛋白质相互作用研究—— 酵母双杂交系统 专业: XXX 学生：XXX 研究背景 系统分类 系统原理 操作过程 研究背景 蛋白质---蛋白质的相互作用是细胞生命活动的基础和特征。例如细胞与细胞、细胞与基质的连接；细胞信号转导；代谢网络；以及转录、翻译调节等. 通过酵母系统进行基因水平的检测，是采用体内实验来研究蛋白间的相互作用。 所有操作均是在核酸水平上进行，无需纯化大量的蛋白，并可精确地测定蛋白质间弱相互作用。 研究背景 酵母双杂交系统分类 核内蛋白质相互作用的研究 膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究 核内蛋白质间相互作用的研究 原理： 转录激活因子通常有两个可分割的、功能相互独立的结构域，即DNA特异性结合结构域（DNA-binding domain， DBD）与转录激活结构域（transcriptional activation domain, AD）。 DBD-Bait 和 prey-AD 这两个融合蛋白是如何构建的？ 又是如何进入同一个酵母细胞的呢？ 因此完整的酵母双杂交由三个部分组成：bait 载体，prey 载体，和带有报告基因的酵母菌株。 根据目前通用的系统中DBD来源的不同，主要分为GAL4系统和LexA系统。 GAL4系统来源于酵母；LexA系统的BD来源于原核生物，在真核生物内缺少同源性，因此可以减少假阳性的出现。 应用 定义两个已知蛋白质间的相互作用； 筛选新的蛋白质间相互作用（即cDNA文库筛选）； 绘制蛋白质相互作用图谱； 寻找具有药物治疗作用的小分子多肽。 膜蛋白、膜相关蛋白和可溶性蛋白间相互作用的研究 原理： 泛素（ubiquitin） N-terminus Lysine 63 Lysine 48 C-terminus 分离的泛素系统 分离泛素（split-ubiquitin）系统 应用 确定两个膜蛋白的相互作用； 从cDNA文库中筛选相互作用的蛋白质。 THANK YOU